[發明專利]一種以巨噬細胞凋亡抑制因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用

有效

• 申請號: 202110046910.3
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112661847B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 王建光;秦楊;吳淦;金勝威;楊新宇
• 申請（專利權）人: 溫州醫科大學
• 主分類號: C07K16/28
• 分類號: C07K16/28;C12N15/13;C12N15/70;C12N1/21;A61K39/395;A61P29/00;A61P37/02;C12R1/19
• 代理公司: 溫州名創知識產權代理有限公司 33258
• 代理人: 朱海曉

本發明屬于基因工程和蛋白質工程技術領域，具體涉及一種以巨噬細胞凋亡抑制因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用。本發明從人scFv噬菌體抗體庫篩選以巨噬細胞凋亡抑制因子（AIM）為靶點的全人源拮抗抗體，并分別測定其核苷酸序列以及得的其編碼基因，氨基酸序列為如SEQ ID NO:1~8中的一種所示，通過該方法獲得的全人源拮抗抗體具有靶向巨噬細胞凋亡抑制因子的特異性。

技術領域

本發明屬于基因工程和蛋白質工程技術領域，具體涉及一種以巨噬細胞凋亡抑制因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用。

背景技術

巨噬細胞凋亡抑制因子AIM也被稱為CD5L，是一種隸屬于清道夫受體超家族的糖蛋白，主要由淋巴組織（脾、淋巴結、胸腺和骨髓）和其他成熟組織中的巨噬細胞分泌。蛋白的分子量大小為54kDa。在血液中，AIM多與五聚體免疫球蛋白M（IgM）結合，以 1:1 的比例穩定存在。 AIM最初被發現具有抑制巨噬細胞凋亡，支持其存活的作用。隨后越來越多的研究表明，AIM 似乎具有多種功能，也可作用于巨噬細胞以外的細胞類型，其中包括 B 淋巴細胞、自然殺傷（NK）T 淋巴細胞和髓細胞。目前，越來越多的研究顯示AIM在炎癥性疾病及免疫應答中可發揮重要作用。如，AIM在經過注射了內毒素(LPS)的小鼠體內表達量顯著上升，且表達量與小鼠感染的嚴重程度相關。AIM在伴有系統性紅斑狼瘡患者血清中的水平也顯著提升，AIM可作為系統性紅斑狼瘡患者疾病嚴重程度和治療效果的生物標志物。AIM在一些炎癥疾病中抑制NKT和T細胞的凋亡及巨噬細胞凋亡，使得這些分泌促炎因子的炎性細胞在病人身體中存活率高于常人，因此AIM在這些疾病中發揮著重要作用。

體內巨噬細胞凋亡抑制因子(AIM)異常高表達與炎癥等多種病變密切相關，因此以AIM為靶標的拮抗劑具有治療這些疾病的作用：然而這些膜內有機小分子拮抗劑一般都以高度保守的ATP作用位點這個生長因子共有的位點為作用位點，故它們存在缺點如毒副作用大，特異靶向性差。膜外部分的拮抗劑報道較少，其中肽類拮抗劑藥物雖具有活性高、用藥劑量小、毒副作用低、代謝終產物為氨基酸等多種優點，但小肽在體內易受肽酶水解而不穩定；小肽的柔性分子結構，可具有多種受體分子識別所需的不同構象，從而使它們的選擇性降低，導致藥效差，也會產生一些副反應。

現有的研究報道：從人組合抗體庫中采用噬菌體展示等技術篩選抗體類的拮抗劑有著有機小分子拮抗劑、肽類拮抗劑所沒有的優點，而且用這種方法產生的抗體不僅結構穩定（避免藥物在到達病灶前，在體內被提前降解），且靶向性良好（可大大減少毒副作用），更為重要的是：這樣產生的抗體能夠克服雜交瘤技術生產抗體易引起排異反應、制備過程復雜、融合效率不高、抗體產量低、抗體不穩定、穿透力弱的缺點，還能實現高通量、快速篩選抗體的目的，且價格低廉。另外這樣篩選出的抗體有時還具備天然抗體所沒有的生理功能。但目前尚無特異作用于AIM的抗體類拮抗劑報道。

發明內容

本發明的目的是為了克服現有技術存在的缺點和不足，而提供一種以巨噬細胞凋亡抑制因子為靶點的全人源拮抗抗體及其應用。

為了實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：一種以巨噬細胞凋亡抑制因子為靶點的全人源拮抗抗體，所述抗體為單鏈抗體，其氨基酸序列為SEQ ID NO:1、SEQ IDNO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所示。

編碼如上述的以巨噬細胞凋亡抑制因子為靶點的全人源拮抗抗體的基因。

所述基因為SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16 。

一種含有如上所述的基因的表達載體。

一種含有如上所述的表達載體的重組細胞。