[發明專利]一種用于草莓炭疽菌快速檢測的LAMP特異引物組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202110045931.3
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112609022A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 高清華;劉雅;段可
• 申請（專利權）人: 上海市農業科學院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 南京華恒專利代理事務所(普通合伙) 32335
• 代理人: 裴素艷

1.一種用于草莓炭疽菌快速檢測的LAMP特異引物組，其特征在于，包括以下所示引物：

引物F3：5’-CTCGTCGAYTTGGAGCCCG-3’(SEQ ID NO:1)；

引物B3：5’-TACCRGCACCGGTACCACC-3’(SEQ ID NO:2)；

引物FIP：5’-TTGGCCCAGTTGTTGCCGGCTACCATGGACGCCGTCCGT-3’(SEQID NO:3)；

引物BIP：5’-AGCTCGTYGAYCAGGTTCTCGATGTTGGAARCCCTGGAGGCAGT-3’(SEQ ID NO:4)；

引物LF：5’-AGACGAAGTTGTCGGGGCG-3’(SEQ ID NO:5)；

引物LB：5’-GCGAGGCYGAGGGMTGCG-3’(SEQ ID NO:6)；

其中，Y＝C/T；R＝A/G；M＝A/C。

2.一種用于檢測草莓炭疽菌的LAMP檢測試劑盒，包括權利要求1所述的LAMP特異引物組。

3.根據權利要求2所述的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述LAMP檢測試劑盒包含LAMP反應體系，該LAMP反應體系包括：MgSO₄、dNTP、buffer、權利要求1所述的LAMP特異引物組、甜菜堿、DNA模板、Bst酶、羥基萘酚藍。

4.根據權利要求3所述的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述LAMP反應體系中各成分的用量，以25μL LAMP反應體系計，包括：MgSO₄：2-8mM，dNTP：0.5-1mM，1×buffer，引物FIP：1-2μM，引物BIP：1-2μM，引物F3：0.1-0.3μM，引物B3：0.1-0.3μM，引物LF：1-2μM，引物LB：1-2μM，甜菜堿：0.5-1M，Bst酶：6-10U，羥基萘酚藍：0.15-0.2mM，DNA模板：10-20ng。

5.根據權利要求3所述的LAMP檢測試劑盒，其特征在于，所述LAMP檢測試劑盒還包括：陽性對照和無模板對照。

6.權利要求1所述的LAMP特異引物組、權利要求2-5任一項所述的LAMP檢測試劑盒在檢測草莓炭疽菌中的應用。

7.一種快速檢測草莓炭疽菌的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待檢測樣品DNA；

(2)以步驟(1)提取的DNA為模板，利用權利要求1所述的LAMP特異引物組進行LAMP反應；

(3)LAMP反應結束后，根據產物顏色的變化來判定結果，顯色為藍色判斷為陽性，即含有草莓炭疽菌；顯色為紫色判斷為陰性，即不含草莓炭疽菌。

8.根據權利要求7所述的快速檢測草莓炭疽菌的方法，其特征在于，步驟(2)中所述LAMP反應的反應體系，包括：MgSO₄、dNTP、buffer、權利要求1所述的LAMP特異引物組、甜菜堿、DNA模板、Bst酶、羥基萘酚藍。

9.根據權利要求7所述的快速檢測草莓炭疽菌的方法，其特征在于，步驟(2)中所述LAMP反應的條件為60℃-65℃恒溫30-60min，優選65℃恒溫30min。