[發(fā)明專利]一類分離含胺類化合物的試劑及應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110045405.7
• 申請日: 2021-01-14
• 公開（公告）號: CN112358399B
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設計）人: 向雙春;鮑繼宇;李云平
• 申請（專利權）人: 蘇州金頂生物有限公司;大連阿拉寧生物技術有限公司
• 主分類號: C07C69/96
• 分類號: C07C69/96;C07C68/02;C07H3/02;C07H5/06;C07H1/06;C07H1/00;C07H13/04;C07K1/16;C07K1/06;C07K7/08;C07K7/06
• 代理公司: 南京眾聯(lián)專利代理有限公司 32206
• 代理人: 朱欣欣

本發(fā)明公開了一類分離純化多肽及含胺基化合物的試劑，即2?烷酰基?氯甲酸?9?芴基甲酯，本發(fā)明通過在9?芴甲醇乙酸酯的2位引入烷酰基，將9?芴甲醇乙酸酯水解后再通過三光氣得到2?烷酰基?氯甲酸?9?芴基甲酯；2?烷酰基?氯甲酸?9?芴基甲酯及衍生物與底物的胺基反應后，通過烷基在HPLC上保留時間與底物和雜質差距很大的原理，使得底物與雜質得到很好的分離。

技術領域

本發(fā)明屬于藥物分離純化領域，具體涉及一種分離或保護胺基化合物的試劑。

背景技術

含有胺基的化合物可以通過色譜分離、重結晶、吸附、萃取等常規(guī)方法分離。超分子化學的主客體包結作用也可以用于胺基化合物的分離。葫蘆脲體現(xiàn)出對某些胺類化合物具有優(yōu)秀的分離效果（a：一種反式七元瓜環(huán)識別生物胺的應用，CN107064199A；b：瓜環(huán)對氨基酸的分子識別研究，《化學學報》2006年10期）。α-環(huán)糊精也對氨基酸具有較好的識別和分離能力（超分子體系中的分子識別研究——Ⅶ.競爭包結法研究α-環(huán)糊精對氨基酸生物分子的手性識別，《科學通報》1997年14期）。

R.B.Merrifield報道了在Fmoc的2位引入磺酸基得到Fmoc(Sulfo)-Cl、Fmoc(Sulfo)-OSu等同系物。用Fmoc(Sulfo)保護的氨基酸或多肽可以用稀堿溶液脫除(J.Org.Chem.，Vol.43，No.25，1978-4809)。Fmoc(Sulfo)保護基不能起到很好的分離多肽或氨基酸的效果，僅僅作為氨基酸保護基使用，由于它在氨基酸上保護時需用到堿水溶液而不穩(wěn)定，同時自身成本高于常用的Fmoc保護基，導致后續(xù)沒有得到應用。

目前多肽、蛋白、抗體等大分子化合物主要通過反相制備色譜和電泳來進行分離。反相制備色譜分離法普遍存在上樣量小，需要多次純化，主峰根部雜質難以去除的問題。上述問題導致大分子藥物質量控制難度很大，藥物產量低、生產成本高。

低極性的化合物在反相制備色譜中的保留時間很長，在同一個化合物上連接了低極性的化合物將延長該化合物的保留時間和親油性，利用這個特性，可以將連接有低極性化合物的多肽、蛋白、抗體等與不含低極性化合物的物質進行分離。

發(fā)明內容

本發(fā)明針對現(xiàn)有技術中存在的不足，提供了一類分離含胺類化合物的試劑、制備和應用方法，以解決現(xiàn)有技術中存在的問題。

通過在9-芴甲醇乙酸酯的2位引入烷酰基，將9-芴甲醇乙酸酯水解后再通過三光氣得到2-烷酰基-氯甲酸-9-芴基甲酯。2-烷酰基-氯甲酸-9-芴基甲酯及衍生物與含有伯胺和仲胺的多肽、小分子的胺基反應后，通過烷基在HPLC上保留時間與底物差別很大的原理，使得目標化合物與雜質得到很好的分離，然后用稀堿把2-烷酰基-9-芴保護基（以下簡稱烷酰基-Fmoc）切除，使多肽、蛋白、小分子得到釋放。2-烷酰基-氯甲酸-9-芴基甲酯及衍生物，其化學結構通式如式1所示：

其中，X為氫原子、氯原子、氟原子、溴原子或硝基；

R表示具有5-40個碳原子的直鏈或支鏈飽和烷基。

2-烷酰基-氯甲酸-9-芴基甲酯及衍生物的結構及合成路線如下：

其中：R表示具有5-40個碳原子的直鏈或支鏈飽和烷基，X₁為氫原子、氟原子、氯原子或溴原子。

當式1中X為硝基時，由于硝基使苯環(huán)鈍化，無法完成傅克酰基化，須先引入烷酰基后硝化，其合成路線如下：

其中：R表示具有5-40個碳原子的直鏈或支鏈烷基。

烷酰基-氯甲酸-9-芴基甲酯及衍生物用于含有伯胺和仲胺的多肽和小分子化合物的分離：