[發(fā)明專利]豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗的研制方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110043464.0
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112546214A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖敏;任華;李桂明;劉德琴;花紀(jì)
• 申請（專利權(quán)）人: 江西正邦科技股份有限公司;江西正邦農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A61K39/215
• 分類號: A61K39/215;A61K39/108;A61K39/295;A61P31/14;A61P31/04;A61P1/12
• 代理公司: 南昌華成聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 36126
• 代理人: 張建新

本發(fā)明的目的是提供一種豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗的研制方法，該二聯(lián)滅活疫苗，包含有抗原和疫苗佐劑，其中抗原是豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌；其中，所述疫苗佐劑為Montanide ISA 206佐劑；其中，所述疫苗中豬流行性腹瀉病毒TCID₅₀≥10^7.0 TCID₅₀/ml，致病性大腸桿菌CFU≥2.5×10^9.0 CFU/mL。該二聯(lián)滅活疫苗免疫原性好，可一針防治兩種疾病，在配種前進(jìn)行免疫注射可使懷孕母豬所產(chǎn)仔豬獲得較好的被動免疫，使仔豬產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，能夠抵抗強(qiáng)毒的攻擊，提高仔豬的存活率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗的研制方法。

背景技術(shù)

豬流行性腹瀉是由豬流行性腹瀉病毒引起的豬的一種急性接觸性腸道傳染病，基本特征有嘔吐、腹瀉、食欲下降和脫水。豬流行性腹瀉病毒主要通過被感染豬只排出的糞便或污染物經(jīng)口途徑自然感染，各種年齡豬均易感，尤以哺乳仔豬最為嚴(yán)重；是影響全球養(yǎng)豬業(yè)的重要病毒之一。該病感染目前還沒有有效的治療方法，主要是以疫苗免疫預(yù)防為主。

豬大腸桿菌病是由致病性大腸桿菌引起的一種小豬腸道傳染病，其中以仔豬黃痢、仔豬白痢和小豬水腫病為常見臨床病癥，以及由其他病因繼發(fā)大腸桿菌后產(chǎn)生腹瀉等情況。仔豬黃痢主要表現(xiàn)為拉黃色或黃綠色稀糞，糞內(nèi)含凝乳片和小氣泡，腥臭；仔豬腹瀉后迅速消瘦、脫水和死亡，死亡率可高達(dá)50%以上。仔豬白痢主要表現(xiàn)為拉白色、黃白色稀糞，干涸后為瓷白色，病豬的體溫和食欲一般無明顯變化，但可看到仔豬皮毛粗糙，發(fā)育遲緩，經(jīng)治療后絕大多數(shù)可恢復(fù)正常，死亡率較低。目前，國內(nèi)尚無商品化的、具有較好的防疫效果的大腸桿菌疫苗或相關(guān)藥物。

目前，市場上并沒有有效的預(yù)防豬流行性腹瀉病毒、致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗的研制方法，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。

本發(fā)明的豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗，包含有抗原和疫苗佐劑，其中抗原是豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌。

進(jìn)一步地，所述疫苗佐劑為Montanide ISA 206佐劑。

進(jìn)一步地，所述疫苗中豬流行性腹瀉病毒TCID₅₀≥10^7.0 TCID₅₀/ml，致病性大腸桿菌CFU≥2.5×10^9.0 CFU/mL。

進(jìn)一步地，所述抗原與佐劑的體積比為1:1。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌（K88）二聯(lián)滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

（1）制備豬流行性腹瀉病毒液，制備致病性大腸桿菌菌液；

（2）分別加入10%甲醛溶液，37℃滅活24小時，獲得豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌滅活抗原；

（3）取兩種滅活菌液按照1:1的比例混勻，攪拌；

（4）混合后的滅活菌液與疫苗佐劑按照體積比為1:1的比例混合、乳化即可制成二聯(lián)滅活疫苗。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明的豬流行性腹瀉病毒和致病性大腸桿菌二聯(lián)滅活疫苗免疫原性好，可一針防治兩種疾病，在配種前進(jìn)行免疫注射可使懷孕母豬所產(chǎn)仔豬獲得較好的被動免疫，使仔豬產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，能夠抵抗強(qiáng)毒的攻擊，提高仔豬的存活率；解決了目前市場上缺少有效的防治豬流行性腹瀉病毒、致病性大腸桿菌所引發(fā)疾病聯(lián)苗的問題。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的實(shí)施例中致病性大腸桿菌攻毒保護(hù)試驗仔豬存活情況示意圖。