[發明專利]一種預防禽流感的動物飼料

在審

• 申請號: 202110042781.0
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112655837A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 李建成;沈波
• 申請（專利權）人: 深圳市微宇藻業科技有限公司
• 主分類號: A23K50/75
• 分類號: A23K50/75;A23K10/16;A23K10/30;A23K20/174;C12M1/00;C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產權代理事務所(普通合伙) 53216
• 代理人: 胡亞蘭

1.一種預防禽流感的動物飼料，其特征在于，包括下列質量份的組份：玉米粉50-60份，黃豆粉10-20份，維生素5-10份，預防禽流感藻類干粉5-15份。

2.根據權利要求1所述動物飼料，其特征在于，所述預防禽流感藻類干粉由能夠表達禽流感病毒抗原的藻類，在培養到平臺期后，開始采收，并噴霧干燥獲得。

3.根據權利要求2所述動物飼料，其特征在于，所述噴霧干燥的具體操作為：通過離心6000rpm/min收集，高溫瞬時干燥進風溫度180℃，出風溫度80℃，即可獲得能預防禽流感藻類干粉。

4.根據權利要求1所述動物飼料，其特征在于，所述維生素，使用復合維生素，其比例按重量份為：維生素D:維生素C:維生素E＝2：1：1。

5.根據權利要求2所述動物飼料，其特征在于，包括下列質量份的組份：玉米粉60份，黃豆粉20份，維生素5份，預防禽流感藻類干粉15份。

6.根據權利要求2所述動物飼料，其特征在于，所述的禽流感藻類干粉為通過分子生物學手段將禽流感病毒抗原表位基因轉導入藻類細胞中，通過光生物反應器，一級、二級擴培培養能夠表達禽流感病毒抗原的藻類細胞。

7.根據權利要求6所述動物飼料，其特征在于，獲得所述的禽流感藻類干粉的具體操作步驟如下：一、載體構建：禽流感抗原基因采用分子生物手段與pUC57 vector連接；其步驟如下：首先將pUC57vector分別用NheⅠ、PmacⅠ；PstⅠ、XhoⅠ；NcoⅠ、PstⅠ分別在37℃的溫度下消化2h,其次同樣用上述酶消化禽流感抗原基因；最后采用T4連接酶在26℃條件下過夜連接，采用熱激法把過夜連接液轉導入感受態細胞Top10中；熱激過后將細胞涂抹于含有相應抗生素的LB平板上，篩選出單克隆；得到含禽流感抗原基因的pUC57質粒；二、采用“珠磨法”進行遺傳轉化:(1)將萊茵衣藻CC849藻類細胞接種于新鮮TAP培養基中，在連續光照的條件下培養至對數期，5000rmp室溫離心6min，棄上清，收集藻細胞；(2)用新鮮無菌的TAP培養液重懸沉淀，調整藻細胞濃度至2×10⁸個細胞/mL；吸取300μl懸浮液到1.5mL的EP管中；(3)加入1μg目的DNA到EP管中，讓玻璃珠、藻株和外源DNA混合快速振蕩25s；(4)將混合液轉移到50mL以滅菌的培養管中，加入10mL無菌新鮮TAP培養液，在100rpm/min搖床弱光下22℃培養20h，使細胞恢復；(5)3000rpm室溫離心5min，去上清收集藻液，用0.8mL TAP輕輕重懸，加入3.5mL，40℃，0.5％TAP培養基，均勻涂布在含10μg/ml的Zeomycin抗生素的TAP平板上；靜至平板30min后倒置平板在22℃光照培養箱中培養3-4周，待平板生長出約1mm大小的綠色單克隆藻團即為能夠表達禽流感病毒抗原的藻類細胞。

8.根據權利要求6所述動物飼料，其特征在于，所述藻類為萊茵衣藻。

9.根據權利要求8所述動物飼料，其特征在于，為能夠使上述基因在萊茵衣藻中的表達產物方便純化，特在其N末端加入了His tag親和標記，采用親和層析的方法對表達產物進行純化。