[發明專利]熱鹽性改變的菊粉酶突變體MutY119T及其應用

有效

• 申請號: 202110041566.9
• 申請日: 2021-01-13
• 公開（公告）號: CN112725306B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 周峻沛;張蕊;黃遵錫;岑瀟龍;唐湘華;許波;李俊俊;韓楠玉;吳倩;高艷秀
• 申請（專利權）人: 云南師范大學
• 主分類號: C12N9/24
• 分類號: C12N9/24;C12N15/56;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

1.熱鹽性改變的菊粉酶突變體MutY119T，其特征在于，該菊粉酶突變體MutY119T的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如權利要求1所述的菊粉酶突變體MutY119T的編碼基因mutY119T。

3.根據權利要求2所述的編碼基因mutY119T，其特征在于，該編碼基因mutY119T的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.包含如權利要求2或3所述的編碼基因mutY119T的重組載體。

5.包含如權利要求2或3所述的編碼基因mutY119T的重組菌。

6.如權利要求1所述的菊粉酶突變體MutY119T的制備方法，其特征在于，該制備方法包含：

（1）將核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的野生外切菊粉酶基因inuAMN8和表達載體pEasy-E1相連接，獲得包含inuAMN8的重組表達質粒pEasy-E1-inuAMN8；

（2）以質粒pEasy-E1-inuAMN8為模板，采用的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7和SEQID NO.8所示，通過PCR擴增得到包含mutY119T的重組表達質粒pEasy-E1-mutY119T；

（3）將重組表達質粒pEasy-E1-mutY119T轉化大腸桿菌BL21(DE3)，獲得包含mutY119T的重組菌株；

（4）培養重組菌株，誘導重組外切菊粉酶突變體MutY119T表達；

（5）回收并純化所表達的重組外切菊粉酶突變體MutY119T。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述包含mutY119T的重組菌株的制備為，將所述重組表達質粒pEasy-E1-mutY119T經DpnI酶消化，利用Mut Express? II FastMutagenesis Kit試劑盒將消化產物進行連接，再通過熱激方式轉化到大腸桿菌BL21(DE3)中。

8.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述誘導采用IPTG進行誘導。

9.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述包含mutY119T的重組菌株的表達產物經Nickel-NTA Agarose親和，再經0~500mM且不為0mM的咪唑洗脫純化，獲得重組外切菊粉酶突變體MutY119T。

10.如權利要求1所述的突變體MutY119T在食品行業的應用。

11.根據權利要求10所述的應用，其特征在于，所述的食品行業包含：釀酒行業。