[發(fā)明專利]一種制備胰腺炎組織單細(xì)胞懸液的試劑盒和方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110040344.5
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號(hào): CN112662614B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陸然;莫顯明;黃巧容;李雪;范川文;趙今
• 申請（專利權(quán)）人: 四川大學(xué)華西醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N5/071
• 分類號(hào): C12N5/071;C12N5/02
• 代理公司: 成都高遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.一種用于制備急性胰腺炎組織單細(xì)胞懸液的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括如下試劑：

試劑(1)：緩沖液，含有2％BSA，5％FBS，Typsin?Inhibitor?0.1mg/mL，ProteaseInhibitor?0.01mg/mL，Benzamidine?HCl?0.1mg/mL，余量為PBS、生理鹽水或動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基；

試劑(2)：消化液1，含有I、II、IV、VIII型膠原酶各1mg/mL，DNase?I?1U/mL，Dispase0.25U/mL，消化液1的液體介質(zhì)為試劑(1)；

試劑(3)：紅細(xì)胞裂解液；

試劑(4)：消化液2：Accutase消化液。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑(1)的動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基是RPMI培養(yǎng)基。

3.一種制備急性胰腺炎組織單細(xì)胞懸液的方法，其特征在于：所述方法是將權(quán)利要求1或2所述的試劑盒用于制備單細(xì)胞懸液的方法，包括如下步驟：

(1)將所述緩沖液預(yù)冷后清洗急性胰腺炎組織；

(2)冰上剪碎胰腺炎組織；

(3)用所述消化液1進(jìn)行消化，直至基本無肉眼可見組織團(tuán)塊；

(4)預(yù)冷的所述緩沖液終止消化，離心棄上清；

(5)加紅細(xì)胞裂解液，裂解紅細(xì)胞，離心棄上清；如果步驟(5)裂解紅細(xì)胞后在顯微鏡下觀察到明顯的細(xì)胞團(tuán)塊，所述方法還包括：(6)使用Accutase消化液繼續(xù)消化，進(jìn)一步使細(xì)胞團(tuán)塊分散，再終止消化。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述方法還包括在步驟(6)后用70μm濾網(wǎng)過濾細(xì)胞。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(3)的消化溫度為37℃，時(shí)間為30-50min，消化期間對細(xì)胞進(jìn)行輕柔吹打。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：步驟(5)裂解紅細(xì)胞是在冰上進(jìn)行的，時(shí)間為5min。