[發(fā)明專利]一種同時(shí)檢測(cè)總抗體和中和抗體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110039221.X
• 申請(qǐng)日: 2021-01-12
• 公開（公告）號(hào): CN112881706B
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏良雨;呂偉華;趙艾鈞;俞先;蔡澤陽;麥德豪;翟子健
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東菲鵬生物有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/569;G01N33/58
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及抗體檢測(cè)領(lǐng)域，具體而言，涉及檢測(cè)方法及檢測(cè)組件，按本發(fā)明方法制備的新冠檢測(cè)試劑能夠同時(shí)檢測(cè)總抗體和中和抗體，可以檢測(cè)疫苗接種后的免疫保護(hù)情況。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種抗體檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

病原微生物侵染細(xì)胞過程中病毒表面受體結(jié)合蛋白是病原微生物進(jìn)入細(xì)胞的關(guān)鍵“鑰匙”，可以打開細(xì)胞受體蛋白的“鎖”，從而進(jìn)入細(xì)胞并啟動(dòng)其復(fù)制過程。

中和抗體是B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的某些抗體，能夠與病原微生物表面的抗原(配體)結(jié)合，從而阻止該病原微生物黏附靶細(xì)胞受體，防止侵入細(xì)胞。

目前的中和抗體檢測(cè)主要在生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室(BSL3)內(nèi)進(jìn)行。利用活病毒細(xì)胞培養(yǎng)的中和試驗(yàn)檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室等級(jí)要求高，嚴(yán)重限制了臨床大規(guī)模的推廣使用。開發(fā)出可在生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室(BSL2)或普通實(shí)驗(yàn)室開展的快速中和抗體檢測(cè)方法，具有重要意義。當(dāng)前也有一些研究團(tuán)隊(duì)開發(fā)了ELISA類測(cè)試，來滿足BSL2類檢測(cè)的需求，但是檢測(cè)試劑僅能單獨(dú)檢出中和抗體無法同時(shí)檢測(cè)出總抗體。檢測(cè)總抗體可以反映接種疫苗后是否產(chǎn)生抗體，檢測(cè)中和抗體可以反映接種疫苗后是否獲得中和抗體免疫效果，指導(dǎo)個(gè)體免疫接種方案的調(diào)整，判斷是否需要調(diào)整免疫接種策略。從而提升群體免疫保護(hù)性的輔助支撐，具有重大意義。檢測(cè)總抗體和中和抗體不僅能更客觀的反應(yīng)機(jī)體當(dāng)前的免疫情況，還能用于分析機(jī)體過去或者未來對(duì)病原微生物的免疫判斷和預(yù)測(cè)。

SARS-CoV-2表面棘突S蛋白(spike protein)是冠狀病毒表面重要的受體結(jié)合位點(diǎn)，其可與細(xì)胞表面病毒特異性受體結(jié)合、介導(dǎo)病毒外膜與細(xì)胞融合、病毒吸附及穿膜；冠狀病毒S蛋白受體結(jié)合域(receptor binding domain， RBM)可使病毒與宿主細(xì)胞表面的血管緊張素轉(zhuǎn)化酶 2(angiotensin-converting enzyme2，ACE2)結(jié)合，并使病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞。當(dāng) SARS-CoV-2在侵入機(jī)體時(shí)，會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生具有保護(hù)作用的中和抗體，專門阻止病原微生物進(jìn)入細(xì)胞，防止感染。中和抗體的多少是疫苗免疫保護(hù)效果的一項(xiàng)重要指標(biāo)，是疫苗評(píng)估和質(zhì)控的重要依據(jù)。

個(gè)體接種疫苗后可通過免疫應(yīng)答產(chǎn)生保護(hù)性抗體，即中和抗體，對(duì)中和抗體進(jìn)行滴度測(cè)定，可以判斷疫苗的臨床療效。因此對(duì)中和抗體的檢測(cè)，可應(yīng)用于疫苗的研發(fā)評(píng)價(jià)，以及疫苗接種后，對(duì)個(gè)體自身免疫效果的評(píng)價(jià)。另外，對(duì)于治愈后的新冠患者檢測(cè)，可以判斷是否存在再次感染的風(fēng)險(xiǎn)。

當(dāng)前疫苗的開發(fā)思路是基于RBD-ACE2侵染機(jī)制，其核心片段是針對(duì) RBD設(shè)計(jì)，一些治療方案也是基于阻斷RBD-ACE2途徑的抗體開發(fā)。

隨著新冠疫苗的推廣接種，現(xiàn)在急需開發(fā)一種方便快捷，無需在BSL3 實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行總抗體和中和抗體檢測(cè)的試劑。

現(xiàn)有的新冠抗體檢測(cè)試劑僅能單獨(dú)檢測(cè)總抗體或者中和抗體，總抗體和中和抗體不能夠進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于能夠同時(shí)檢測(cè)樣品中的總抗體和中和抗體。在數(shù)據(jù)判讀上也能夠帶來方便，同時(shí)檢測(cè)總抗體和中和抗體可以對(duì)測(cè)試結(jié)果糾偏，例如當(dāng)總抗體檢測(cè)為陰性中和抗體為陽性時(shí)可以反饋檢測(cè)結(jié)果存在異常，需要復(fù)檢。

鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了以下至少一種實(shí)施方式：

本發(fā)明提供了檢測(cè)方法，包括：

一種抗體的檢測(cè)方法，所述方法包括：

步驟1：樣品與配體或含配體的片段接觸，檢測(cè)反應(yīng)信號(hào)；

步驟2：再與所述配體的受體或其片段接觸，檢測(cè)反應(yīng)信號(hào)。

其特征在于，所述檢測(cè)方法可以檢測(cè)中和抗體和/或總抗體，通過步驟 1檢測(cè)的是能夠結(jié)合所述配體的總抗體，步驟2檢測(cè)的是結(jié)合所述配體的中和抗體。