[發(fā)明專利]一種從胚胎干細(xì)胞分化獲得肺上皮細(xì)胞的方法及其使用的培養(yǎng)基有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110037419.4 | 申請(qǐng)日： | 2021-01-12 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN112608879B | 公開（公告）日： | 2022-08-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 向?qū)捿x;范華昊;童貽剛;李彤;莊輝;賴鑫源;洪碧霞;陳楊楨;羅天明;宋立華;安小平 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京大學(xué);北京化工大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12N5/071 | 分類號(hào)： | C12N5/071;C12N5/0735;C12Q1/02;C12Q1/70;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 閆書寧 |
| 地址： | 100191*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 胚胎 干細(xì)胞 分化 獲得 上皮細(xì)胞 方法 及其 使用 培養(yǎng)基 | ||
1.一種從前腸內(nèi)胚層細(xì)胞分化產(chǎn)生肺上皮細(xì)胞的方法，包括如下步驟：
(a4)將前腸內(nèi)胚層細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基I，培養(yǎng)8-12天；
所述分化培養(yǎng)基I為在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入CHIR99021、BMP4、視黃醇、FGF10和FGF7后得到的培養(yǎng)基；
所述分化培養(yǎng)基I中，CHIR99021的濃度為1-10μM；BMP4的濃度為5-15ng/ml；視黃醇的濃度為1-10μM；FGF10的濃度為10-25ng/ml；FGF7的濃度為5-20ng/ml；
(a5)完成步驟(a4)后，將所述細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基II，繼續(xù)培養(yǎng)，直至獲得肺上皮細(xì)胞；
所述分化培養(yǎng)基II為在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入CHIR99021、IBMX、地塞米松、FGF10和FGF7后得到的培養(yǎng)基；
所述分化培養(yǎng)基II中，CHIR99021的濃度為1-10μM；IBMX的濃度為0.05-0.15mM；地塞米松的濃度為30-60nM；FGF10的濃度為10-25ng/ml；FGF7的濃度為5-20ng/ml；
所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的溶質(zhì)及其濃度為(1-2)×N2 supplement、(1-2)×B27、40-100ng/ml維生素C、1-5mM谷氨酰胺、0.1-1.0μM硫代甘油和0.01-0.1％牛白蛋白；溶劑為40-60％的DMEM/F12和40-60％的IMDM。
2.一種從內(nèi)胚層細(xì)胞分化產(chǎn)生肺上皮細(xì)胞的方法，包括如下步驟：
(a2)將內(nèi)胚層細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基A，培養(yǎng)1-2天；
所述分化培養(yǎng)基A為在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入Dorsomorphin和SB431542后得到的培養(yǎng)基；
(a3)完成步驟(a2)后，將所述細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基B，培養(yǎng)1-3天，得到前腸內(nèi)胚層細(xì)胞；
所述分化培養(yǎng)基B為在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入IWP2和SB431542后得到的培養(yǎng)基；
(a4)完成步驟(a3)后，將前腸內(nèi)胚層細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基I，培養(yǎng)8-12天；
所述分化培養(yǎng)基I為在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入CHIR99021、BMP4、視黃醇、FGF10和FGF7后得到的培養(yǎng)基；
所述分化培養(yǎng)基I中，CHIR99021的濃度為1-10μM；BMP4的濃度為5-15ng/ml；視黃醇的濃度為1-10μM；FGF10的濃度為10-25ng/ml；FGF7的濃度為5-20ng/ml；
(a5)完成步驟(a4)后，將所述細(xì)胞接種至分化培養(yǎng)基II，繼續(xù)培養(yǎng)，直至獲得肺上皮細(xì)胞；
所述分化培養(yǎng)基II為在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入CHIR99021、IBMX、地塞米松、FGF10和FGF7后得到的培養(yǎng)基；
所述分化培養(yǎng)基II中，CHIR99021的濃度為1-10μM；IBMX的濃度為0.05-0.15mM；地塞米松的濃度為30-60nM；FGF10的濃度為10-25ng/ml；FGF7的濃度為5-20ng/ml；
所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基的溶質(zhì)及其濃度為(1-2)×N2 supplement、(1-2)×B27、40-100ng/ml維生素C、1-5mM谷氨酰胺、0.1-1.0μM硫代甘油和0.01-0.1％牛白蛋白；溶劑為40-60％的DMEM/F12和40-60％的IMDM。
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