[發明專利]一種惡性胰島α細胞瘤基因工程動物模型的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202110036990.4
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112868597B
• 公開（公告）日: 2023-02-07
• 發明（設計）人: 亓翠玲;王麗京;劉小花
• 申請（專利權）人: 廣東藥科大學
• 主分類號: A01K67/02
• 分類號: A01K67/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 單香杰

本發明公開了一種惡性胰島α細胞瘤基因工程動物模型的構建方法，包括如下步驟：將Slit2基因過表達后的Rip1?Tag2小鼠飼養至8周齡以上即得胰島α細胞瘤基因工程動物模型。該動物模型在整體水平更自然地模擬臨床上胰島α細胞瘤的發生發展過程，可有效地將復雜的生物學問題與藥物的作用結合起來考察藥物的治療效果。而且在本發明建立的小鼠模型活體動物中進行研究，能兼顧類似于人體內的各種背景因素，研究結論具有很高的可靠性。因此，本發明的小鼠模型是一種很好的用來篩選治療胰島α細胞瘤藥物的有效工具，對尋找有效治療藥物的關鍵靶點以及治療方法具有重要的意義。

技術領域

本發明涉及疾病動物模型制備技術領域，具體地，涉及一種惡性胰島α細胞瘤基因工程動物模型的構建方法及應用。

背景技術

胰腺神經內分泌腫瘤臨床少見，根據是否存在因激素過度分泌而引起的臨床癥狀，胰腺神經內分泌腫瘤可劃分為功能性腫瘤和無功能性腫瘤兩大類。功能性腫瘤中最常見的是胰島素瘤(胰島β細胞瘤)，其次是胃泌素瘤，而胰高血糖素瘤(胰島α細胞瘤)則十分少見。胰島β細胞瘤是最常見的胰腺內分泌腫瘤，占胰島細胞腫瘤的70％～75％，大多數為良性，惡性者占10～16％，發生率低于千萬分之一。常為單發且腫瘤體積較小，大概50％病人在診斷時就已經發生了轉移，易轉移到局部淋巴結和肝臟。據報道惡性胰島β細胞瘤切除后，5年生存率為63％，10年生存率為29％。House等報道行根治性手術者平均生存6.5年。

胰島α細胞瘤是來源于胰島α細胞的一種罕見的胰腺神經內分泌腫瘤，發病率大概為兩千萬分之一，大多數為惡性。常為單發且腫瘤體積較大，大概60％-70％的胰島α細胞瘤在診斷時就已經發生了轉移，易轉移到肝、淋巴結，還可轉移到肺、腎及腎上腺，少數病人還可轉移到骨。Wermers RA等匯總了1975年至1991年21位在梅奧診所住院的胰高血糖素瘤患者的臨床和病理特征，其中20位病人有肝轉移，平均生存時間為4.91年。總之，胰島α細胞瘤比胰島β細胞瘤惡性程度高、更容易發生局部浸潤、淋巴結轉移和遠處轉移，而且患者生存時間短。

Rip1-Tag2小鼠是由Hannahan實驗室在1984年構建完成的轉基因自發胰島β細胞瘤小鼠模型，Rip1-Tag2小鼠由于分泌胰島素的β細胞能表達SV40T抗原(T-antigen,Tag)而產生多階段發展的胰島β細胞瘤。Rip1-Tag2小鼠的腫瘤發展具有明顯的階段性，是研究胰島β細胞瘤的經典動物模型。發展過程如下：1-3周為正常階段；4-5周開始出現增生的胰島；約6周時出現血性胰島(為腫瘤發展的原位癌期)，其特征是胰島的血管膨大和微血管出血；9-10周出現腫瘤，腫瘤分為腫瘤期、浸潤Ⅰ期及浸潤Ⅱ期，14周時占2-4％。

目前用于研究自發胰腺神經內分泌腫瘤的小鼠模型只有Rip1-Tag2小鼠，而Rip1-Tag2小鼠為自發惡性胰島β細胞瘤小鼠模型，目前尚未有自發惡性胰島α細胞瘤的小鼠模型。這嚴重制約了抗惡性胰島α細胞瘤藥物的開發研制，并制約了惡性胰島α細胞瘤的病因、發病機制及治療的研究。所以，尋找新的、能夠快速模擬人類惡性胰島α細胞瘤臨床病理發展過程的基因工程小鼠模型，將為惡性胰島α細胞瘤的治療提供新的治療途徑和希望，并具有更加廣闊的應用前景。

發明內容

本發明為了克服現有技術的上述不足，提供一種惡性胰島α細胞瘤基因工程動物模型的構建方法。

本發明的另一個目的是提供一種惡性胰島α細胞瘤基因工程動物模型在篩選治療惡性胰島α細胞瘤藥物中的應用，并提供了一種研究惡性胰島α細胞瘤病因及發病機制的經典動物模型。

為了實現上述目的，本發明是通過以下技術方案予以實現的：

一種惡性胰島α細胞瘤基因工程動物模型的構建方法，將Slit2基因過表達后的Rip1-Tag2小鼠飼養至8周齡以上即得胰島α細胞瘤基因工程動物模型。本發明并非重新創造一種新的小鼠品種用于構建惡性胰島α細胞瘤動物模型，而是在Rip1-Tag2小鼠的基礎上，通過特定基因的改造，并讓特定基因表達一定時間后得到的基因工程小鼠，才能模擬人類惡性胰島α細胞瘤臨床病理發展過程。