[發明專利]一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法

在審

• 申請號: 202110036708.2
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112680406A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 千日成
• 申請（專利權）人: 艾爾斯（浙江）醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/071;A01N1/02
• 代理公司: 北京眾達德權知識產權代理有限公司 11570
• 代理人: 江慧

1.一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述方法包括：

在剖宮產過程中，通過卵巢表面可見的卵泡獲得卵泡液；

通過所述卵泡液，獲得未成熟的卵丘細胞-卵子-復合體；

將未成熟的所述卵丘細胞-卵子-復合體放置于卵子體外成熟培養液中進行體外成熟培養，獲得體外成熟的卵丘細胞-卵子-復合體；

去除體外成熟的所述卵丘細胞-卵子-復合體周邊的卵丘細胞和顆粒細胞，獲得體外成熟卵母細胞；

將所述體外成熟卵母細胞進行玻璃化冷凍保存，獲得具有發育潛能的卵子，以實現生育力保存。

2.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述剖宮產卵巢表面可見的卵泡的直徑為2-10毫米。

3.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述卵子體外成熟培養液為艾爾斯體外成熟培養液RC-1060加入終濃度70-80mIU/毫升的促卵泡生長激素和終濃度70-80mIU/毫升促黃體生成激素混勻獲得的混合液。

4.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述卵子體外成熟培養液的體積內圈為1毫升，外圈為2毫升。

5.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，將未成熟的所述卵丘細胞-卵子-復合體放置于卵子體外成熟培養液中進行體外成熟培養，獲得體外成熟的卵丘細胞-卵子-復合體，具體包括：

將所述卵子體外成熟培養液分別加入雙孔培養皿的內圈和外圈內，于溫度為37℃三氣培養箱內平衡≥30分鐘，獲得內圈培養液和外圈培養液；

將未成熟的所述卵丘細胞-卵子-復合體置于所述外圈培養液內清洗，后置于所述內圈培養液中進行體外成熟培養，獲得體外成熟的卵丘細胞-卵子-復合體。

6.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，每個所述雙孔培養皿的內圈至多放入10個未成熟的所述卵丘細胞-卵子-復合體。

7.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述體外成熟培養的時間為24-48小時。

8.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述去除體外成熟的所述卵丘細胞-卵子-復合體周邊的卵丘細胞和顆粒細胞，獲得體外成熟卵母細胞，具體包括：

將所述體外成熟培養后的卵丘細胞-卵子-復合體轉移到透明質酸酶溶液中放置1分鐘后，用艾爾斯剝卵管D-190吹打去除所述成熟的卵丘細胞-卵子-復合體外圍的顆粒細胞，再用艾爾斯D-160和D-130吹打去除卵子周邊的卵丘細胞，獲得成熟卵母細胞。

9.根據權利要求1所述的一種通過剖宮產獲卵的生育力保存方法，其特征在于，所述將所述成熟卵母細胞進行玻璃化冷凍保存，獲得具有發育潛能的卵子，具體包括：

將玻璃化冷凍液分別制成玻璃化冷凍V1小滴液和V2小滴液；

將所述成熟卵母細胞置于所述玻璃化冷凍V1小滴液中平衡5-8分鐘后轉移到所述玻璃化冷凍V2小滴液中1鐘，然后把卵子轉移放置在艾爾斯封閉式載桿前段小槽內，蓋好封閉保護套，輕輕放入液氮中進行玻璃化冷凍保存。

10.根據權利要求9所述的一種卵源獲取未成熟卵，進行體外成熟和玻璃化冷凍的生育力保存方法，其特征在于，所述艾爾斯封閉式載桿前段小槽內放入的所述成熟卵母細胞≤2個。