[發明專利]一種促進軟骨形成的透明質酸水凝膠的制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110036160.1
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN113143967B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 魏世成;滕彬宏;黑玉
• 申請（專利權）人: 北京大學口腔醫學院
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K9/06;A61K47/34;A61K47/36;A61K47/18;A61P19/04;C08F299/00;C08F2/48;C08F8/30
• 代理公司: 北京萬思博知識產權代理有限公司 11694
• 代理人: 劉冀

1.一種促進軟骨形成的透明質酸水凝膠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)功能化透明質酸水凝膠的制備：用甲基丙烯酸酯對HA進行改性，得到MeHA，后與光引發劑反應，交聯形成水凝膠；

(2)采用邁克爾加成反應，接枝RGD多肽和HAV多肽于MeHA；

(3)KGN封裝PLGA微球的制備：將溶解的PLGA和KGN加入殼聚糖溶液中乳化成球，得到包封KGN的PLGA微球；

(4)將包裹KGN的PLGA微球引入接枝RGD和HAV多肽的MeHA體系，交聯成膠。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述功能化透明質酸水凝膠的制備包括以下步驟：

將1-2重量份的HA溶解在50-100重量份去離子水中，滴入5-20重量份的甲基丙烯酸酐溶液；調節反應pH至8-9，在冰浴中反應12-48小時；所得的MeHA溶液透析3-5天，凍干后，-20℃保存；將1-2重量份MeHA溶解于50-150重量份含光引發劑的去離子水溶液中，所得MeHA溶液在紫外光下照射，交聯形成水凝膠。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述得到的MeHA溶液濃度為1wt％-2wt％；所述紫外光為365nm，1W；所述交聯時間為30-120s。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述接枝RGD多肽和HAV多肽于MeHA包括以下步驟：

將1-5重量份的RGD/HAV多肽或者2-10重量份RGD+HAV多肽和10-100重量份的MeHA水凝膠溶解在三乙醇胺緩沖液中，調節溶液PH至8-9，37℃在下反應6-48小時，然后透析3-5天，凍干后，-20℃保存。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述RGD多肽、HAV多肽的肽用量濃度為50-150mol/g HA。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，所述KGN封裝PLGA微球的制備包括以下步驟：

將1-5重量份的PLGA，在室溫下，在10-100重量份的二氯甲烷溶液中溶解1-3小時；1-5重量份的KGN在10-100重量份的丙酮中溶解；將兩種溶液混合，慢慢滴入50-200重量份的的殼聚糖溶液中，在10,000-30,000轉/分鐘，冰浴中高速攪拌5-10秒，攪拌得到乳濁液；將1-5重量份的乳濁液滴入10-50重量份的殼聚糖溶液中，200轉/分鐘-500轉/分鐘攪拌6-12小時；10,000-15,000轉/分鐘，離心20-30分鐘，收集包封KGN的PLGA微球。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，離心后收集PLGA微球還包括用去離子水洗滌3-5次，冷凍干燥保存的步驟。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，所述將包裹KGN的PLGA微球引入接枝RGD和HAV多肽的MeHA體系包括以下步驟：

將包封KGN的PLGA微球添加到接枝RGD和HAV多肽的MeHA水凝膠溶液中，通過紫外光交聯成膠。

9.一種根據權利要求1-8任一項所述促進軟骨形成的透明質酸水凝膠的制備方法獲得的透明質酸水凝膠產品。

10.根據權利要求9所述的透明質酸水凝膠在制備促進軟骨形成的藥物中的應用。