[發明專利]脊髓OLIG2+神經祖細胞誘導及自我更新培養體系、誘導方法及應用

有效

• 申請號: 202110035777.1
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112626023B
• 公開（公告）日: 2023-08-04
• 發明（設計）人: 李文林;張冠宇;孫平新;袁媛;呂竺蔓
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍軍醫大學
• 主分類號: C12N5/0797
• 分類號: C12N5/0797;A61K35/30;A61P25/00;C12Q1/02
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 趙青

1.一種人多能干細胞來源的脊髓OLIG2⁺神經祖細胞誘導及自我更新培養體系，其特征在于，由基礎培養基以及與該基礎培養基分別組合使用的誘導分化因子和體外維持因子組成，

其中，所述基礎培養基由DMEM/F12液體基礎培養基、0.5-5×B27添加劑、0.5-5×N2添加劑、1％青霉素/鏈霉素、0.01-500μg/mL2-磷酸-維生素C組成；

所述誘導分化因子由0.01-50μMGSK3抑制劑、0.01-500μMTGFβ抑制劑以及0.01-500μMBMP抑制劑組成；

所述體外維持因子由0.01-50μMGSK3抑制劑、0.01-500μMTGFβ抑制劑、0.01-5000ng/mLSonicHedgehog、0.01-20μMSmoothened激動劑、0.01-500ng/mLEGF家族生長因子、0.01-500ng/mLFGF家族生長因子、0.01-500μMBMP抑制劑、0.01-50μMJAK1/2抑制劑、0.01-10000nMSrc激酶抑制劑和0.01-50μMRetinoicAcid組成，

所述GSK3抑制劑為CHIR99021、BIO及LY2090314中的一種或多種；

TGFβ抑制劑為SB431542、LY2109761及A-83-01中的一種或多種；

BMP抑制劑為DMH1、K02288、LDN-193189、Noggin中的一種或多種；

Smoothened激動劑為purmorphamine、SAG及GSA10中的一種或多種；

EGF家族生長因子為EGF、TGFα及HB-EGF中的一種或多種；

FGF家族生長因子為FGF1～FGF23中的任意一種或多種；

JAK1/2抑制劑為Ruxolitinib、AZD1480、Pacritinib及Filgotinib中的一種或多種；

Src激酶抑制劑為Dasatinib、Saracatinib及KX2-391中的一種或多種。

2.根據權利要求1所述的人多能干細胞來源的脊髓OLIG2⁺神經祖細胞誘導及自我更新培養體系，其特征在于：

其中，B27添加劑的量為0.5×B27添加劑，N2添加劑的量為0.5×N2添加劑，2-磷酸-維生素C的濃度為60μg/mL。

3.根據權利要求1所述的人多能干細胞來源的脊髓OLIG2⁺神經祖細胞誘導及自我更新培養體系，其特征在于：

其中，所述誘導分化因子中，GSK3抑制劑為3μM的CHIR99021，TGFβ抑制劑為2μM的SB431542，BMP抑制劑為2μM的K02288；

體外維持因子中，GSK3抑制劑為1μM的CHIR99021，TGFβ抑制劑為2μM的SB431542濃度，SonicHedgehog的濃度為100ng/mL，Smoothened激動劑為0.2μM的SAG，EGF家族生長因子為10ng/mL的EGF，FGF家族生長因子為20ng/mL的FGF2，BMP抑制劑為1μM的K02288，JAK1/2抑制劑為1μM的Ruxolitinib，Src激酶抑制劑為10nM的Dasatinib，RetinoicAcid的濃度為0.5μM。