[發明專利]一種特異靶向感染部位的中性粒細胞膜仿生納米材料的制備方法

有效

• 申請號: 202110035293.7
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112807288B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 汪龍;李婧怡;牛誠誠;胡懿郃
• 申請（專利權）人: 中南大學湘雅醫院
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K47/46;A61K45/00;A61K47/34;A61P29/00;A61P31/04;B82Y5/00;B82Y30/00;B82Y40/00
• 代理公司: 長沙朕揚知識產權代理事務所(普通合伙) 43213
• 代理人: 郭蓓霏

1.一種特異靶向感染部位的中性粒細胞膜仿生納米材料的制備方法，所述中性粒細胞膜仿生納米材料包括載藥納米粒，以及包裹在所述載藥納米粒表面的中性粒細胞膜，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：將中性粒細胞膜與載藥納米粒按照膜蛋白與納米粒的質量比為1:2的配比混合，對得到的混合物進行超聲混合，隨后通過體積排阻色譜法將游離的細胞膜微球以及載藥納米粒分離，得到純化的中性粒細胞膜仿生納米材料；所述超聲混合時采用的超聲能量設置為50%，在超聲混合的過程中，每工作30s暫停30s，共工作2min；

所述中性粒細胞膜為小鼠骨髓中的中性粒細胞膜；所述中性粒細胞膜的制備方法包括如下步驟：收集小鼠骨髓液，用40-70μm的濾網過濾骨髓液，700-2000rpm離心7-12min后棄上清，用DPBS重懸；然后依次注入淋巴細胞分離液及核細胞和粒細胞分離液，600-800g離心20-40min后吸取離心管中白色霧狀層液體，加入到DPBS中，1400-2000rpm離心7-15min，重懸即得中性粒細胞懸液；將所述中性粒細胞膜懸液放入液氮中迅速冷凍30-60秒，取出后放入37℃水浴鍋5-10分鐘，繼續放入液氮中迅速冷凍，反復凍融2-5次后，在4℃下10000-12000g離心7-15min，分離上清液即得中性粒細胞膜懸液；

所述收集小鼠骨髓液的方法具體包括如下步驟：將小鼠股骨和/或脛骨放入裝有DPBS/肝素混合液的培養皿中，剪去股骨、脛骨的兩端，使用DPBS/肝素混合液沖洗骨髓腔，收集骨髓液；所述DPBS/肝素混合液中肝素與DPBS的體積比為1:1000，置于冰上預冷備用；

所述載藥納米粒為PLGA納米粒，所述PLGA納米粒的制備方法包括如下步驟：將PLGA溶解在二氯甲烷中，加入質量百分比為4%的PVA溶液，聲振混合2min，加入雙蒸水定容至20mL，磁力攪拌至溶劑揮發完全，4000rmp離心10min，得到的上清液10000rpm離心7min，得到的沉淀用PBS重懸即得PLGA納米粒懸液。