[發明專利]骨髓間充質干細胞和髓核細胞共培養的方法及應用

在審

• 申請號: 202110034720.X
• 申請日: 2021-01-12
• 公開（公告）號: CN112920992A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 農魯明
• 申請（專利權）人: 常州市第二人民醫院
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;C12N5/0775
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

本發明涉及細胞培養技術領域，更具體地，本發明涉及骨髓間充質干細胞和髓核細胞共培養的方法及應用。包括：將髓核細胞和骨髓間充質干細胞分別接種到培養板和培養板上方的插入物中，進行共培養。本發明通過提取腰椎間盤退行性變的人體骨髓，分離培養得到骨髓間充質干細胞后，與相同來源的退變的椎間盤髓核細胞共培養，刺激椎間盤再生，從根本上改善了椎間盤退變，促進髓核細胞的體外培養。通過將髓核細胞接種在培養上，骨髓間充質干細胞接種在插入物上，進行非接觸式共培養，發現可明顯抑制退變髓核組織得到的髓核細胞的退變，促進髓核組織的體外培養。

技術領域

本發明涉及細胞培養技術領域，更具體地，本發明涉及骨髓間充質干細胞和髓核細胞共培養的方法及應用。

背景技術

腰椎間盤退行性變與腰痛密切相關，腰椎間盤退行性變除了引起腰痛癥狀外，還可能引起下肢疼痛、麻木甚至活動障礙。一些研究已經確認髓核細胞凋亡以及椎間盤細胞外基質的丟失是椎間盤退變的結果。目前的治療方案包括保守治療和手術治療，保守治療通常不能長時間解除患者的痛苦，手術治療除了對患者的創傷外還會讓患者負擔巨大的治療費用，手術后的相關并發癥也是不可忽視的問題，而且這兩種治療方式目的是緩解癥狀，而不是改變腰椎間盤退行性變的病理過程。

有研究發現髓核細胞數量的減少以及細胞外基質流失可能是椎間盤退變的原因，因此移植自體細胞可能對椎間盤退變有抑制作用。然而，既往研究表明，髓核細胞體外培養困難，培養條件要求較高，體外傳代至第5代即可出現老化表現，通常很少能通過體外培養的方法獲得從退變髓核組織中的髓核細胞。

發明內容

為了解決上述問題，本發明第一個方面提供了一種骨髓間充質干細胞和髓核細胞共培養的方法，包括：

將髓核細胞和骨髓間充質干細胞分別接種到培養板和培養板上方的插入物中，進行共培養。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核細胞來自退變的髓核組織。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核細胞的接種量為2×10³/cm²～4×10³/cm²。

作為本發明一種優選的技術方案，所述骨髓間充質干細胞的接種量為0.5×10³/cm²～1.5×10³/cm²。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核細胞和骨髓間充質干細胞的接種量比為(2～4)：1。

作為本發明一種優選的技術方案，所述骨髓間充質干細胞為第二代骨髓間充質干細胞。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核細胞為第三代髓核細胞。

作為本發明一種優選的技術方案，所述插入物的材料選自聚對苯二甲酸乙二醇酯、聚碳酸酯、聚四氫呋喃中的一種。

作為本發明一種優選的技術方案，所述共培養的條件為37℃，5％CO₂。

本發明第二個方面提供了一種所述的骨髓間充質干細胞和髓核細胞共培養的方法在抑制髓核細胞退變的應用。

本發明與現有技術相比具有以下有益效果：

(1)本發明通過提取腰椎間盤退行性變的人體骨髓，分離培養得到骨髓間充質干細胞后，與相同來源的退變的椎間盤髓核細胞共培養，刺激椎間盤再生(包括增強細胞外基質的合成、髓核細胞的增殖、骨髓間充質干細胞分化為髓核細胞)，從根本上改善了椎間盤退變，促進髓核細胞的體外培養。

(2)通過將髓核細胞接種在培養上，骨髓間充質干細胞接種在插入物上，進行非接觸式共培養，發現可明顯抑制退變髓核組織得到的髓核細胞的退變，促進髓核組織的體外培養。