[發明專利]一種用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法

在審

• 申請號: 202110034301.6
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112807448A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 魚麗娟;郝曉柯
• 申請（專利權）人: 魚麗娟
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 王峰剛

1.一種用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，所述用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法包括：

采用活體熒光成像儀進行腫瘤細胞外泌體分布靶器官不同時間成像信息的動態跟蹤；根據活體熒光成像儀獲得的動態跟蹤信息再通過離體熒光成像儀進行腫瘤細胞外泌體分布靶器官不同時間成像信息的動態跟蹤。

2.如權利要求1所述的用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，所述不同時間包括：4h、24h及48h。

3.如權利要求1所述的用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，所述采用離體熒光成像儀進行腫瘤細胞外泌體分布靶器官不同時間成像信息的動態跟蹤包括：對離體裸鼠的心、肝、腎、脾、胃、小腸器官進行離體熒光成像，獲取腫瘤細胞外泌體分布靶器官成像分布信息。

4.如權利要求1所述的用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，所述采用活體熒光成像儀或離體熒光成像儀進行腫瘤細胞外泌體分布靶器官不同時間成像信息的動態跟蹤前還需進行：

步驟一，提取腫瘤細胞外泌體，并利用質膜染色劑對腫瘤細胞來源外泌體進行熒光標記，得到熒光標記的外泌體和熒光染料殘留的混合物；

步驟二，向熒光標記的外泌體和熒光染料殘留的混合物中加入PBS并進行超速離心，得到熒光標記的腫瘤細胞外泌體；

步驟三，將熒光標記好的腫瘤細胞外泌體和稀釋的熒光染料應用于裸鼠。

5.如權利要求4所述的用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，步驟一中，所述利用質膜染色劑對腫瘤細胞來源外泌體進行熒光標記包括：

將100μg外泌體使用PBS稀釋至1mL；按照質膜染色劑與腫瘤細胞來源外泌體體積比例1:200進行混合，并于37℃下孵育20分鐘。

6.如權利要求4所述的用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，步驟一中，所述質膜染色劑為Vybrant DID，所述Vybrant DID激發波長和發射波長分別為600nm和670nm。

7.如權利要求4所述的用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法，其特征在于，步驟二中，所述向熒光標記的外泌體和熒光染料殘留的混合物中加入PBS并進行超速離心，得到熒光標記的腫瘤細胞外泌體包括：

(1)向熒光標記的外泌體和熒光染料殘留的混合物中加入PBS稀釋至35mL；并于120000g下超速離心90min；

(2)去除上清，并用無菌吸水紙吸干，藍色沉淀使用100μL PBS吹打溶解后保存備用。

8.一種實施權利要求1～2、4～7任意一項所述用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法的在外泌體介導的癌癥器官特異性轉移機制檢測上的應用。

9.一種如權利要求1所述用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法在在癌癥靶向性治療檢測上的潛在應用。

10.一種如權利要求1所述用于確定腫瘤細胞來源外泌體體內分布信息的方法在腫瘤來源外泌體的功能分析設備或以腫瘤來源外泌體為基礎的標志物開發上的應用。