[發明專利]一種基于S基因斷裂的AAV-HBV重組病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及應用

有效

• 申請號: 202110034255.X
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112725292B
• 公開（公告）日: 2022-05-31
• 發明（設計）人: 夏宇塵;李聰;鐘有權
• 申請（專利權）人: 武漢大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/36;C12N15/864;A01K67/027
• 代理公司: 北京金智普華知識產權代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種基于S基因斷裂的AAV?HBV重組病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及應用。本發明采用同源重組的方法構建pAAV?HBV1.04質粒，通過三質粒共轉染293T細胞方法體外包裝生產重組病毒。用重組病毒通過尾靜脈注射免疫系統正常的C57BL/6小鼠形成HBV cccDNA持續存在的HBV慢性感染小鼠模型。本發明中的小鼠模型能產生真實HBV cccDNA并且能作為唯一得轉錄模板發揮功能。本發明構建的新型HBV慢性感染小鼠模型可用于研究長期慢性感染條件下HBV cccDNA形成和維持的機制，用于研究與免疫系統相關的問題，用于尋找和評估新的抗HBV藥物。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及一種基于S基因斷裂的AAV-HBV重組病毒、乙肝病毒小鼠模型的建立方法及應用。

背景技術

乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)是嗜肝性DNA病毒，基因組為部分雙鏈松弛環狀DNA(Relaxed circular DNA,rcDNA)，全長約3.2kb，是目前已知的最小的DNA病毒(Ganem,D.and A.M.Prince,Hepatitis B virus infection--natural history andclinical consequences.N Engl J Med,2004.350(11):p.1118-29.)。HBV感染宿主細胞后其rcDNA會在宿主細胞細胞核中被DNA損傷修復系統修復為共價閉合環狀DNA(covalentlyclosed circular DNA,cccDNA)，cccDNA是病毒轉錄的模板。盡管疫苗能有效預防HBV感染，但是對全球約2.5億慢性乙肝患者沒有幫助(WHO.Hepatitis B Fact Sheet.Availableat:https://www.who.int/news-room/fact-sheets/detail/hepatitis-b(Accessed:March 2020)(2020).)。HBV慢性感染能導致逐漸惡化的肝疾病如肝纖維化、肝硬化和肝細胞癌，仍然是嚴重的公共健康問題。HBV建立長期慢性感染不能被清除的主要原因是其復制中間體cccDNA無法被現有藥物清除。

目前美國食品和藥品管理局(FDA)批準用于治療乙型肝炎的藥物為干擾素α和核苷/核苷酸類似物，核苷/核苷酸類似物可以有效抑制病毒的復制，但是不能清除病毒感染已經建立的cccDNA池，停藥后病毒復制反彈。干擾素α也能抑制病毒復制，但是存在副作用大，應答率低，費用昂貴等問題，也不能清除cccDNA池(Gregorek,H.,et al.,Persistenceof HBV-DNA in children with chronic hepatitis B who seroconverted to anti-HBsantibodies after interferon-alpha therapy:correlation with specific IgGsubclass responses to HBsAg.J Hepatol,2005.42(4):p.486-90.)。研究HBV慢性感染機制和尋找新的能治愈乙型肝炎藥物仍然是重大的科學問題。目前關于cccDNA生物學特征還不是很清楚，主要原因是缺乏合適的慢性感染模型。HBV長期慢性感染的原因是cccDNA的長期穩定存在，不能被徹底清除。因此建立合適的HBV慢性感染模型來尋找這些問題的答案十分關鍵。