[發(fā)明專利]一種載脂多糖復(fù)合納米粒的制備方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110033905.9
• 申請(qǐng)日: 2021-01-11
• 公開（公告）號(hào): CN112826932A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙光宗;常淑芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶醫(yī)科大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K41/00
• 分類號(hào): A61K41/00;A61K9/51;A61K47/34;A61K49/22;A61P35/00;A61K39/39;A61K39/00
• 代理公司: 北京匯澤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11228
• 代理人: 武君

本發(fā)明公開了一種載脂多糖復(fù)合納米粒的制備方法及其應(yīng)用，屬于生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。脂多糖復(fù)合納米粒具有穩(wěn)定的外膜，外膜由聚乳酸?羥基乙酸共聚物(PLGA)制成，納米粒內(nèi)包封有由液態(tài)氟碳(PFP)，吲哚菁綠(ICG)，脂多糖(LPS)和水組成的混合水溶液；復(fù)合納米粒中，ICG的載荷量為10.61％±0.12％，脂多糖的載荷量為1.70％。本發(fā)明的脂多糖復(fù)合納米粒，通過(guò)在PLGA納米粒的基礎(chǔ)上，加入了免疫佐劑LPS，ICG，氧氣以及攜氧的相變材料PFP，不僅提高了ICG在循環(huán)過(guò)程中的穩(wěn)定性和半衰期，還可聯(lián)合光聲動(dòng)力誘導(dǎo)機(jī)體免疫反應(yīng)產(chǎn)生，與LPS共同激活免疫系統(tǒng)，在腫瘤免疫治療方面，具有推廣應(yīng)用價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種載脂多糖復(fù)合納米粒的制備方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

在過(guò)去的十年中，診療一體化已經(jīng)成為一個(gè)蓬勃發(fā)展的癌癥治療研究領(lǐng)域，這使得診斷和治療更加緊密的結(jié)合，使治療方案更加個(gè)體化。光療法(如光熱療法PTT和光動(dòng)力療法PDT) 因其侵襲性小、副作用小、易控制等優(yōu)點(diǎn)，在新興的腫瘤治療中顯示出巨大的優(yōu)勢(shì)。聲動(dòng)力療法(Sonodynamic therapy,SDT)是在光動(dòng)力療法(PDT)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的腫瘤治療方法。與PDT不同，PDT組織穿透性差，超聲能深入組織內(nèi)，并以腫瘤組織為靶點(diǎn)，介導(dǎo)超聲波增敏劑的細(xì)胞毒性。光聲聯(lián)合療法(Sono-Photodynamic therapy，SPDT)是一種能夠協(xié)同發(fā)揮各自的優(yōu)勢(shì)和增強(qiáng)免疫保護(hù)功能的方法。

吲哚菁綠(ICG)是FDA批準(zhǔn)的用于測(cè)定肝功能和肝血流量的試劑。此外，ICG作為一種光譜吸收峰在800nm左右的染料，可用于PDT及PTT治療。ICG在光和聲的介導(dǎo)下可產(chǎn)生ROS，ROS可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫原性細(xì)胞死亡(immunogenic cell death，ICD)，同時(shí)釋放受損的相關(guān)分子模式(Damaged-associated molecular patterns，DAMP)，包括鈣網(wǎng)蛋白(calreticulin，CRT)和釋放高遷移率群盒1(high mobility group box 1，HMGB 1)。DAMP的釋放會(huì)激活免疫系統(tǒng)，特別是通過(guò)誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞(DC)的成熟，DC最終遷移到淋巴結(jié)，抗原與幼稚T細(xì)胞的相互作用使它們成為分化的CTL(CD8⁺)。此外，當(dāng)ICD發(fā)生時(shí)，誘導(dǎo)的死亡腫瘤細(xì)胞可釋放腫瘤相關(guān)抗原。這些即將死亡的腫瘤細(xì)胞可以作為全細(xì)胞癌癥疫苗，它可以誘導(dǎo)對(duì)所有釋放的潛在腫瘤抗原的免疫。因此，ICG在光聲的作用下可以在腫瘤部位產(chǎn)生“腫瘤疫苗”，克服腫瘤抗原異質(zhì)性，這可能是獲得高免疫原性腫瘤疫苗，并將其用于癌癥免疫治療的一種很有效和簡(jiǎn)便的方法。

脂多糖(LPS)革蘭氏陰性菌外膜的組成部分，Toll-like receptors 4(TLR4)在免疫系統(tǒng)的單核細(xì)胞(如DC和巨噬細(xì)胞)、淋巴細(xì)胞和脾細(xì)胞中有較高的表達(dá)，它可對(duì)LPS進(jìn)行選擇性識(shí)別。DC是最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞(antigen presenting cells，APC)，也是適應(yīng)性免疫應(yīng)答的關(guān)鍵介質(zhì)。LPS通過(guò)激活TLR 4影響APC表面共刺激分子的表達(dá)和控制抗原的攝取而促進(jìn)抗原的加工和呈遞，這是誘導(dǎo)和調(diào)節(jié)適應(yīng)性免疫的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。此外，LPS和DAMP還可促進(jìn) IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-12和IL-6等細(xì)胞因子分泌增加，它們?cè)诳鼓[瘤治療中發(fā)揮重要作用。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種載脂多糖復(fù)合納米粒的制備方法及其應(yīng)用。

經(jīng)研究，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

1、一種載脂多糖復(fù)合納米粒，所述納米粒具有穩(wěn)定的外膜，所述外膜由聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)制成，所述納米粒內(nèi)包封有混合水溶液，所述混合水溶液由液態(tài)氟碳(PFP)，吲哚菁綠(ICG)，脂多糖(LPS)和水組成；所述納米粒中，吲哚菁綠的載荷量為10.61％±0.12％，脂多糖的載荷量為1.70％。

優(yōu)選的，所述所述納米粒為球型構(gòu)造，所述納米粒的粒徑為195.24±11.56nm。