[發明專利]一種利用副黃假單胞菌降解污水中苯酚的方法

在審

• 申請號: 202110032503.7
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN113023900A
• 公開（公告）日: 2021-06-25
• 發明（設計）人: 朱宏飛;丁寧;李白蓮
• 申請（專利權）人: 遼寧工程技術大學
• 主分類號: C02F3/34
• 分類號: C02F3/34;C12N1/20;C12N1/02;C02F101/34;C12R1/38
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用副黃假單胞菌(P.parafulva)DTSP2(現專利保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，編號為GDMCC NO.61389)降解污水中的苯酚方法，其特征在于按照以下工藝步驟進行：

(1)目標菌種的篩選

①配制乳糖膽鹽培養基(LBB)：按照LBB標準配比配制液體培養基,120℃～130℃滅菌20～40min，固體培養基需要加入15～25g/L瓊脂粉，其它成分與液體培養基相同；

②革蘭氏陰性菌和苯耐菌選擇性富集：將5～10ml下游水樣加入到100mL的選擇性滅菌液體培養基中，向LBB中加入苯，濃度為0.8～1.2mg/mL，接種瓶以100～120轉/分的速度在25～35℃振蕩到至渾濁狀態培養10h～12h；

③將液體培養物用苯在固體LBB上劃線；

④配制Luria-Bertani(LB)培養基：按照標準配比配制LB液體培養基，120℃～130℃滅菌20min～40min，固體培養基需要加入15～25g/L瓊脂粉，其它成分與液體培養基相同。

⑤將含有黃色素的單個菌落轉移到固體LB培養基中，以增加其生長；

(2)目標菌的分離和鑒定

使用通用引物27F/1492R對16SrRNA基因進行了靶向擴增，以獲得(1)中分離株的物種信息。純化的擴增子由大連Takara公司進行測序，將獲得的序列通過BLASTn查詢16SrRNA序列數據庫，根據檢索到的序列，使用Mega6.0軟件分析該分離株的系統發育關系；

(3)苯酚降解率測定及應用

①采用梯度法測定分離菌的苯酚耐受極限：將處于指數期(密度約為1×10⁷-1×10⁸菌群形成單位/ml)的菌株接種到含苯酚的LB培養基中，從100～1200mg/l依次設置苯酚濃度梯度，為了避免數據波動，每次降解濃度測定重復三次；所有的容量瓶在25℃～35℃、100～120轉/分的條件下培養10～12h，苯酚濃度使用高效液相色譜(HPLC)測量，苯酚降解率(PDR)由降解物與初始量的比值確定；

②苯酚降解菌的實際應用：利用模擬樣品檢測菌株對苯酚的降解能力，嘗試利用該菌株進行環境保護或修復。

2.根據權利要求1所述的一種副黃假單胞菌DTSP2降解污水中苯酚的方法，其特征在于對菌種的篩選并通過設置苯酚濃度梯度，尋找該降解菌對苯酚降解率最高的濃度，進而找到該降解菌最佳應用場合。