[發明專利]一種Ac63-64基因敲除的桿狀病毒表達載體

有效

• 申請號: 202110030831.3
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN114292877B
• 公開（公告）日: 2023-08-22
• 發明（設計）人: 請求不公布姓名
• 申請（專利權）人: 陜西桿粒生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C12N15/34;C12N5/10;C12P21/00
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種基因敲除型桿狀病毒表達載體，涉及生物技術領域。本發明將桿狀病毒表達載體上相鄰的兩個非必需基因Ac63和Ac64同時敲除后即獲得所述基因敲除型桿狀病毒表達載體。本發明的基因敲除型桿狀病毒表達載體使外源蛋白表達水平提高至少一倍，同時病毒的增殖特性基本不受影響。表達產量的提高能顯著降低企業的生產成本。該桿狀病毒表達載體可用于生物制品工業領域，特別是亞單位疫苗工業領域。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種基因敲除的桿狀病毒表達載體。

背景技術

桿狀病毒是特異感染節肢動物的雙鏈DNA病毒，苜蓿銀紋夜蛾多核型多角體病毒（Autographa?californica?nucleopolyhedrovirus,?AcMNPV）是桿狀病毒的模式種。自從1983年Smith?GE等首次用桿狀病毒在昆蟲細胞中表達人β-干擾素基因以來（Mol?CellBiol.?1983;?3:2156-65.），由于具有低成本、高產量，而且具備各種翻譯后修飾系統等優點，桿狀病毒表達載體系統在科研和生產中被廣泛應用。

然而，相較于工業上普遍使用的原核表達系統（大腸桿菌、枯草芽孢桿菌）和酵母表達系統，桿狀病毒表達載體系統的產量還不盡人意，這導致桿狀病毒表達系統的生產成本居高不下。

因此，需要研究特定的技術手段以提高上述表達載體系統的產量。

發明內容

本發明的目的在于提供一種基因敲除的高產重組桿狀病毒載體，旨在解決背景技術提及的表達量低的問題。

為達到上述目的，本發明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發明實施例提供了一種基因敲除的桿狀病毒表達載體，將桿狀病毒AcMNPV表達載體上相鄰的兩個非必需基因Ac63和Ac64同時敲除后即獲得所述基因敲除的桿狀病毒表達載體。

作為優選，所述Ac63的敲除是指所述Ac63的啟動子區被破壞或所述Ac63的編碼區被破壞或所述Ac63的啟動子區與其編碼區被同時破壞或所述Ac63的3’UTR被破壞。

作為優選，所述Ac64的敲除是指所述Ac64的啟動子區被破壞或所述Ac64的編碼區被破壞或所述Ac64的啟動子區與其編碼區被同時破壞。

另一方面，本發明提供了一種重組蛋白，用所述新型桿狀病毒表達載體構建重組病毒，然后感染昆蟲宿主細胞，所述宿主細胞經過培養、增殖并表達為重組蛋白，即獲得所述重組蛋白。

又一方面，本發明提供了所述新型桿狀病毒表達載體在生物制品工業上的應用。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

本發明在研究時發現桿狀病毒基因組中存在大量非必需基因，并且一些非必需基因彼此相鄰成簇存在，這些成簇存在的非必需基因（含未知功能基因）包括Ac63和Ac64相鄰的兩個基因；本發明在同時Ac63和Ac64后，發現蛋白表達水平顯著提高、病毒的增殖水平沒有明顯變化，其說明本發明通過上述敲除技術可以提供一個具有優良生產性狀和高產特性的桿狀病毒表達載體。

附圖說明

圖1?本發明提供的桿狀病毒載體的基因敲除策略示意圖；

圖2?使用本發明提供的桿狀病毒載體表達的熒光素酶FluC全細胞蛋白電泳圖；

圖3?使用本發明提供的桿狀病毒載體表達的綠色熒光蛋白GFP總熒光強度柱狀圖；

圖4?本發明提供的桿狀病毒載體的一次生長曲線。

具體實施方式

為了使本發明的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合實施例，對本發明進行進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。