[發(fā)明專利]一種半乳糖醛酸磁性納米顆粒純化聚半乳糖醛酸酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110030728.9
• 申請(qǐng)日: 2021-01-11
• 公開（公告）號(hào): CN112725303B
• 公開（公告）日: 2023-06-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏冬青;馬迪哈·沙赫扎德·洛迪;阿伊莎·沙欣;穆罕默德·塔希爾·汗;伊姆蒂亞茲·沙菲克;扎胡爾;薩姆拉;王恒;王艷菁
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué);巴基斯坦拉合爾大學(xué);旁遮普大學(xué);煙臺(tái)智醫(yī)醫(yī)藥科技有限公司;海門智醫(yī)醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/24
• 分類號(hào): C12N9/24;C12N13/00;H01F41/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種半乳糖醛酸磁性納米顆粒純化聚半乳糖醛酸酶的方法，其特征在于，將磁性納米顆粒作為載體與半乳糖醛酸結(jié)合，形成Glt-MNP納米復(fù)合材料，通過施加外部磁場(chǎng)對(duì)exo-PG進(jìn)行純化；

磁性納米顆粒作為載體與半乳糖醛酸結(jié)合形成Glt-MNP納米復(fù)合材料具體步驟如下：

(1)將MNP懸浮在雙蒸餾水中，并超聲處理7-10分鐘，由于重力作用沉降的顆粒被分離，剩余的細(xì)小顆粒懸浮；

(2)將步驟(1)的顆粒與0.4gGlt結(jié)合，溶于120ml蒸餾水中，并與0.3g的MNP混合，將混合物在冰上超聲處理4-5分鐘，用1M，pH8的NaOH調(diào)節(jié)，并在37℃下孵育15分鐘；

(3)將0.4g的1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺EDAC添加到步驟(2)的溶液中，并用1M，pH6.4的HCl調(diào)節(jié)；

(4)不斷搖晃將混合物在25℃下保持6小時(shí)，最后再次加入0.4g的EDAC，并在25℃持續(xù)搖動(dòng)下保持20小時(shí)；

(5)通過施加外部磁場(chǎng)分離結(jié)合的納米顆粒，并用蒸餾水洗滌五次；

根據(jù)所述方法制備得到的Glt-MNP納米復(fù)合材料的粒徑為100-200nm，平均尺寸為141.4nm，Z平均180.9和聚指數(shù)值為0.33，

矯頑力Hci為46.912G，磁化強(qiáng)度Ms為0.71989emu，保持力Mr為33.184E-3emu。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，exo-PG的純化具體步驟如下：

(1)在250ml培養(yǎng)基中接種2ml黃曲霉稀釋培養(yǎng)物，所述黃曲霉稀釋培養(yǎng)物中含有10¹⁰/ml孢子，并在定軌振蕩器中于30℃，160rpm孵育5天，除去培養(yǎng)基，并通過無菌的Whatman濾紙過濾，得到培養(yǎng)濾液；

(2)將約1.0gGlt-MNP與10ml培養(yǎng)濾液混合，并在30℃下持續(xù)搖動(dòng)孵育60分鐘；

(3)通過施加外部磁場(chǎng)從溶液中去除Glt-MNP，并用PG緩沖液洗滌兩次，所述PG緩沖液為10mMTris-Cl，pH7.3；

(4)通過與5ml洗脫緩沖液混合，所述洗脫緩沖液為0.3MNaCl的10mMTris，pH7.3，0.1MGlt，將與Glt-MNP結(jié)合的exo-PG除去。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所有純化步驟均在4℃的冰浴中完成。