[發明專利]髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架的制備方法

有效

• 申請號: 202110029210.3
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112641996B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 農魯明
• 申請（專利權）人: 常州市第二人民醫院
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61L27/20;A61L27/22;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/52
• 代理公司: 上海微策知識產權代理事務所(普通合伙) 31333
• 代理人: 湯俊明

本發明涉及生物技術與組織工程技術領域，更具體地，本發明涉及髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架的制備方法。包括：將髓核間充質干細胞聯合殼聚糖微球和相容劑混合后，放入纖維凝膠支架中，得到髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架。采用液狀細胞支架，可通過注射的方式進行再植入，有效減少了對退變椎間盤的損傷。該細胞支架能夠在短時間內由液狀變為膠狀，能夠最大程度的還原髓核細胞的應力微環境，有利于髓核間充質干細胞的增殖、分化及髓核細胞產生細胞外基質。本發明制備得到的髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架具有好的機械穩定性，髓核間充質干細胞聯合殼聚糖可更好的附著于纖維凝膠支架上，進行生長和分化。

技術領域

本發明涉及生物技術與組織工程技術領域，更具體地，本發明涉及髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架的制備方法。

背景技術

增加髓核細胞的數量和質量的研究在組織工程中具有重要意義，但髓核細胞實際應用于臨床，缺乏足夠的途徑獲取足量的髓核細胞，間充質干細胞最早于1968年由德國科學家Frieden?Stein在骨髓中發現，隨后還發現存在于人體多種組織器官中，并可在體外培養擴增，且能在特定條件下分化為包括神經細胞、成骨細胞、軟骨細胞在內的多類細胞，還在多種人體重要功能中起重要調節作用。

目前應用較多的是骨髓來源的間充質干細胞，但是骨髓來源的間充質干細胞存在以下問題：①隨著年齡的老化，干細胞數目顯著降低、增殖分化能力大幅度衰退；②制備過程不容易質控；③取材時對患者有損傷，患者有骨髓疾病時不能采集，即使是健康供者，亦不能抽取太多的骨髓。這都限制了骨髓間充質干細胞的應用，使得尋找其他來源的間充質干細胞成為當前面臨的一個重要課題。

目前經過研究證明髓核間充質干細胞具有更強的細胞增殖能力，如從退化椎間盤中分離的髓核間充質干細胞具有較強的增殖能力和分化潛能，且在過去的研究中發現單純植入髓核間充質干細胞被證明是可行且有效的，雖然在具體應用中出現了植入后滲漏和分化缺乏控制等問題，但也為后續的組織工程髓核治療腰椎間盤突出癥打下了堅實的基礎。為解決這一系列的問題，研究者們提出了將細胞聯合支架植入的治療方法。可在細胞支架的選擇上也并非是一帆風順的：雖然可注射支架具有傳遞細胞潛能的作用，但其缺乏所需的機械穩定性；而那些具有較滿意的機械性能的支架卻也有著因整合不良導致植入材料的擠出或排出等問題。且植入的操作難度及對椎間盤等的損傷大小也是一個不容忽視的問題。

發明內容

為了解決上述問題，本發明第一個方面提供了一種髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架的制備方法，包括：

將髓核間充質干細胞聯合殼聚糖微球和相容劑混合后，放入纖維凝膠支架中，得到髓核間充質干細胞聯合殼聚糖纖維凝膠支架。

作為本發明一種優選的技術方案，所述相容劑包括纖維蛋白溶液和凝血酶溶液。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核間充質干細胞聯合殼聚糖微球的質量和相容劑的體積比為5mg：(50～150μL)。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核間充質干細胞聯合殼聚糖微球的制備方法包括：將殼聚糖微球放入髓核間充質干細胞的完全培養基中交聯、離心、冷凍干燥，得到髓核間充質干細胞聯合殼聚糖微球。

作為本發明一種優選的技術方案，所述髓核間充質干細胞的個數為4×10⁶～6×10⁶。

作為本發明一種優選的技術方案，所述殼聚糖微球的制備方法包括：

將表面活性劑和溶劑混合，加入殼聚糖溶液，混合后，加入交聯劑攪拌、離心、清洗、冷凍干燥，得到殼聚堂微球。

作為本發明一種優選的技術方案，所述交聯劑選自二價陽離子、京尼平、戊二醛、已二酸二酰肼、環氧氯丙烷、碳化二亞胺、氯化鈣、三聚磷酸鈉、聚磷酸鈉中的一種或多種。