[發(fā)明專利]TLR9基因人源化的動物模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110028725.1 | 申請日： | 2021-01-08 |
| 公開（公告）號： | CN113088537B | 公開（公告）日： | 2022-11-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 沈月雷;姚佳維;郭朝設(shè);張美玲;黃蕤;郭雅南;白陽;趙磊 | 申請（專利權(quán)）人： | 百奧賽圖（北京）醫(yī)藥科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C07K19/00;C07K14/705;C12N15/62;C12N15/12;C12N5/10;A01K67/027;A61K49/00 |
| 代理公司： | 北京領(lǐng)科知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11690 | 代理人： | 徐丹丹;劉玉玲 |
| 地址： | 102609 北京市大興區(qū)中關(guān)*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | tlr9 基因 人源化 動物 模型 構(gòu)建 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種TLR9基因人源化的動物模型的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的動物模型體內(nèi)表達(dá)人源化TLR9蛋白，且所述的動物模型內(nèi)源TLR9蛋白表達(dá)降低或缺失，所述的構(gòu)建方法包括在小鼠內(nèi)源TLR9基因座上用人TLR9基因的序列替換小鼠TLR9基因序列，所述的構(gòu)建方法包括將編碼SEQ ID NO:2的26-819位所示氨基酸序列的核苷酸序列替換為編碼SEQ ID NO:4的26-818位所示氨基酸序列的核苷酸序列，所述的非人動物為小鼠。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的人源化TLR9蛋白的氨基酸序列包含SEQ ID NO：12所示氨基酸序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的動物模型的基因組中包含SEQID NO：7所示核苷酸序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的動物模型的基因組中包含人源化TLR9基因，所述的人源化TLR9基因的核苷酸序列包含下列組中的任一種：
（a）SEQ ID NO：11所示核苷酸序列；或，
（b）SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9和/或SEQ ID NO：10所示核苷酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的構(gòu)建方法包括將編碼人TLR9蛋白胞外區(qū)的核苷酸序列可操作的連接在非人動物TLR9基因座上。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的構(gòu)建方法包括使用靶向載體，所述的靶向載體包含SEQ ID NO：7的核苷酸序列；所述的靶向載體還包含5’臂和/或3’臂，所述的5’臂如SEQ ID NO：5所示，所述的3’臂序列如SEQ ID NO：6所示。
7.一種TLR9基因的靶向載體，其特征在于，所述的靶向載體包含SEQ ID NO：7，所述的靶向載體還包含5’臂和/或3’臂，所述的5’臂如SEQ ID NO：5所示，所述的3’臂序列如SEQID NO：6所示。
8.一種多基因修飾的非人動物的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的構(gòu)建方法包括如下步驟：
i）采用權(quán)利要求1-6任一所述的構(gòu)建方法獲得的TLR9基因人源化的動物模型；
ii）將步驟i）獲得的TLR9基因人源化的動物模型與其他基因修飾的非人動物交配、體外授精或直接進(jìn)行基因編輯，并進(jìn)行篩選，得到多基因修飾的非人動物；
所述的非人動物為小鼠。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述的其他基因修飾的非人動物包括基因CD137、LAG-3、CTLA-4、TIM-3、BTLA、4-1BB、CD27、CD28、CD47、TIGIT、GITR、OX40、PD-1或PD-L1修飾的非人動物。
10.來源于權(quán)利要求1-6任一所述的構(gòu)建方法獲得的TLR9基因人源化的動物模型、權(quán)利要求8-9任一所述的構(gòu)建方法獲得的多基因修飾的非人動物的應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用為非疾病的診斷或治療目的，所述的應(yīng)用包括：
A）在需要涉及人類細(xì)胞的免疫過程的產(chǎn)品開發(fā)中的應(yīng)用；
B）作為藥理學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的模型系統(tǒng)中的應(yīng)用；
C）在生產(chǎn)和利用動物實(shí)驗疾病模型中的應(yīng)用；
D）在篩選、驗證、評價或研究TLR9功能、人TLR9信號機(jī)理中的應(yīng)用；
E）在篩選、驗證、評價或研究靶向人的藥物、藥效中的應(yīng)用；或，
F）在篩選和評估人用藥及藥效研究方面的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，A）中所述的涉及人類細(xì)胞的免疫過程的產(chǎn)品開發(fā)包括制造抗體。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，E）中所述的靶向人的藥物包括靶向人的抗體。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于，E）中所述的靶向人的藥物包括免疫相關(guān)疾病藥物、抗腫瘤或抗炎癥藥物。
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