[發(fā)明專利]一種復(fù)合菌液制劑的制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110027754.6
• 申請日: 2021-01-11
• 公開（公告）號: CN112646724A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 胡永紅;彭妍娟;楊文革;郭宏山;高會杰;陳明翔;周凱;杜春杰;范怡
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.一種復(fù)合菌液制劑的制備方法，其具體步驟如下：

(1)通過菌種活化、種子液的制備、搖瓶培養(yǎng)得到嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌發(fā)酵液；所述的菌種是嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌，保藏編號是CGMCC1.14975；

(2)微生態(tài)制劑的制備：對發(fā)酵液進行離心，棄上清液，收集離心后的菌體，將嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌菌體、海藻糖和脫脂乳按照體積比(1.5-2):(1.5-2):1的比例混合均勻，將樣品在超低溫冰箱預(yù)凍后，放入冷凍干燥機進行真空冷凍干燥，得嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌微生態(tài)制劑，目標微生態(tài)制劑的多環(huán)芳烴降解率達60％～70％；

(3)無機營養(yǎng)液的制備：將MgSO₄、苯胺、L-苯丙氨酸、酒石酸、水楊酸、KH₂PO₄、水按照質(zhì)量比(2-4)：(2-4)：(1-2)：(1-2)：(1-2)：(1-2)：10000的比例混合，攪拌均勻，充分溶解，靜置冷卻，得到無機營養(yǎng)液；

(4)復(fù)合菌液制劑的制備：將步驟(2)得嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌微生態(tài)制劑加入步驟(3)制備的無機營養(yǎng)液中，其中嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌微生態(tài)制劑的加入質(zhì)量與無機營養(yǎng)液的體積比為10-15mg/mL；邊攪拌邊調(diào)節(jié)pH至6.0-7.0之間，制得復(fù)合菌液制劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的菌種活化為：將嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌單菌落轉(zhuǎn)接到種子斜面培養(yǎng)基，活化培養(yǎng)溫度為28-30℃，培養(yǎng)24-30h；其中種子斜面培養(yǎng)基成分為：菲100-150mg/L、蛋白胨5-10g/L、氯化鈉1-5g/L、瓊脂10-25g/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的種子液的制備為：取活化的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌，接入裝填體積量為15％-20％的種子培養(yǎng)基中，pH控制在6.0-7.0，溫度為28-3℃，轉(zhuǎn)速為130-160r/min，培養(yǎng)16-20h，得種子液；其中種子培養(yǎng)基成分為：菲100-150mg/L、蛋白胨5-10g/L、酵母浸出物1-5g/L，氯化鈉1-5g/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(1)中所述的搖瓶培養(yǎng)為：按種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基體積接種量為10-40％，將種子液裝入發(fā)酵培養(yǎng)基裝填體積量為15％-20％的容器中，置于搖床中，28-30℃震蕩培養(yǎng)10-14h，轉(zhuǎn)速為130-160r/min；其中發(fā)酵培養(yǎng)基成分：菲100-150mg/L、蛋白胨5-10g/L、磷酸二氫鉀1-2g/L、磷酸氫二鉀1-2g/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(2)中離心轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min，離心時間為10-15min；預(yù)凍溫度為-60℃至-80℃，預(yù)凍時間為5-7h；真空冷凍干燥的真空度40-60Pa。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟(4)中制得復(fù)合菌液制劑中目標復(fù)合菌液嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌活菌數(shù)達95-105億cfu/mL。