[發明專利]靶向CD30和CD24的雙靶點CAR-T細胞的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202110027546.6
• 申請日: 2021-01-10
• 公開（公告）號: CN112725283B
• 公開（公告）日: 2023-01-06
• 發明（設計）人: 廖興華;王君;王運丹;項園;張慧敏;李慧;李佳蓬;張曉宇;徐瑤;張同存
• 申請（專利權）人: 武漢科技大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0783;C12N15/85;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 武漢紅觀專利代理事務所(普通合伙) 42247
• 代理人: 李杰梅

本發明提出了靶向CD30和CD24的雙靶點CAR?T細胞的制備及其應用，CAR?T細胞嵌合抗原受體包括抗CD30單鏈抗體、抗CD24單鏈抗體、鉸鏈區、跨膜區、胞內區。雙靶點CAR?T可以很好地解決單CAR?T的脫靶效應，且不會大程度地加重細胞因子釋放綜合征，獲得更好的殺瘤效果。

技術領域

本發明涉及基因工程領域，尤其是靶向CD30和CD24的雙靶點CAR-T細胞的構建方法及應用。

背景技術

嵌合抗原受體T細胞(CAR-T)治療是目前治療難治復發血液系統腫瘤的重要方法。針對B細胞急性白血病，淋巴瘤，獲得了非常好的療效數據。但此療法缺乏腫瘤特異性的靶抗原，易產生脫靶效應，引起針對B細胞抗原的CAR-T會殺傷B細胞導致體液免疫功能缺失，以及嚴重的細胞因子釋放綜合征(CRS)等，因此靶點的選擇是CAR-T細胞治療重要的研究內容。

CD30是腫瘤壞死因子受體超家族(TNFRSF)成員之一，屬于Ⅰ型跨膜糖蛋白，高表達于霍奇金淋巴瘤(HL)和間變性大細胞淋巴瘤(ALCL)，低表達于非病理狀態下活化的T細胞、B細胞表面，而正常細胞不表達。CD24，是一個高度糖基化的糖基磷脂酰肌醇錨定的細胞表面蛋白。CD24和固有免疫細胞上的Siglec-10分子相互作用，傳遞免疫抑制性信號，來抑制炎癥反應。

本發明通過靶向CD30和CD24的雙靶點CAR-T細胞識別和清除CD30和CD24陽性的惡性腫瘤細胞，避免了單靶點CAR存在的脫靶效應，且不會大程度地加重細胞因子釋放綜合征，獲得更好的殺瘤效果。

發明內容

有鑒于此，本發明提出了靶向CD30和CD24的雙靶點CAR-T細胞治療淋巴瘤。

本發明的技術方案是這樣實現的：靶向CD30和CD24的雙靶點CAR-T細胞，所述雙靶點CAR-T細胞嵌合抗原受體包括抗CD30單鏈抗體、抗CD24單鏈抗體、鉸鏈區、跨膜區和胞內區。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述CD30單鏈抗體包括抗CD30單鏈抗體的輕鏈和抗CD30單鏈抗體的重鏈。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述抗CD24單鏈抗體包括CD24單鏈抗體的輕鏈和抗CD24單鏈抗體的重鏈。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述鉸鏈區包括CD8α。

在以上技術方案的基礎上，優選的，跨膜區包括CD28。

在以上技術方案的基礎上，優選的，胞內區包括CD28、4-1BB和CD3ζ。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述抗CD30單鏈抗體的輕鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述抗CD30單鏈抗體的重鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述抗CD24單鏈抗體的輕鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述抗CD24單鏈抗體的重鏈的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述CD8α鉸鏈區的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述CD28跨膜區和胞內區的核苷酸序列如SEQID NO.6所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述4-1BB胞內區的核苷酸序列如SEQ IDNO.7所示。

在以上技術方案的基礎上，優選的，所述CD3ζ胞內區的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示。

更進一步優選的，靶向CD30和CD24的雙靶點CAR-T細胞的構建方法，其特征在于，步驟如下：