[發明專利]MHC分子人源化的非人動物的構建方法及應用

有效

• 申請號: 202110026238.1
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN113105555B
• 公開（公告）日: 2023-05-30
• 發明（設計）人: 沈月雷;郭朝設;張美玲;黃蕤;郭雅南;白陽;姚佳維;尚誠彰
• 申請（專利權）人: 百奧賽圖（北京）醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10;A01K67/027
• 代理公司: 北京領科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11690
• 代理人: 徐丹丹;劉玉玲

1.一種MHC分子人源化的非人動物的構建方法，其特征在于，所述的非人動物體內表達MHC嵌合蛋白，所述的MHC嵌合蛋白包含1）人B2M蛋白；和，2）MHC嵌合α鏈，

所述的非人動物體內內源B2M蛋白表達降低或缺失，

所述的人B2M蛋白不含信號肽區域；

所述的MHC嵌合α鏈包含HLA-A2.1蛋白的信號肽、Alpha-1、Alpha-2區域；其中，所述的人HLA-A2.1的信號肽序列插入到人B2M蛋白之前；

所述的構建方法包括用編碼MHC嵌合蛋白的MHC嵌合基因替換非人動物B2M基因外顯子1至外顯子3的核苷酸序列；

所述的MHC嵌合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：61或SEQ?ID?NO：62所示。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述的非人動物的基因組中包含MHC嵌合基因，所述的MHC嵌合基因包含人B2M基因，和，MHC嵌合α鏈基因，

所述的人B2M基因不包含編碼人B2M的信號肽的核苷酸序列，所述的MHC嵌合α鏈基因包含編碼HLA-A2.1蛋白的信號肽、Alpha-1、Alpha-2區域的核苷酸序列，所述編碼HLA-A2.1蛋白的信號肽的核苷酸序列插入到人B2M編碼區的核苷酸序列之前。

3.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的MHC嵌合α鏈基因還包含編碼HLA-A2.1蛋白Alpha-3、連接肽、胞內區和跨膜區的核苷酸序列。

4.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的MHC嵌合α鏈基因包含人HLA-A2.1基因的外顯子1至外顯子3的編碼序列。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述的MHC嵌合α鏈基因還包含HLA-A2.1基因的外顯子4至外顯子8的編碼序列。

6.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述MHC嵌合α鏈基因的核苷酸序列包含SEQ?ID?NO：15、SEQ?ID?NO：13或SEQ?ID?NO：54所示核苷酸序列。

7.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的人B2M基因包含編碼人B2M蛋白的核苷酸序列或者人B2M基因的外顯子1至外顯子3的編碼序列，其中，所述的人B2M蛋白不含信號肽，所述的人B2M基因不含人B2M蛋白信號肽的編碼序列。

8.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的人B2M基因包含SEQ?ID?NO：14所示核苷酸序列。

9.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的MHC嵌合基因還包含非人動物H2-D1基因的外顯子4至外顯子8的編碼序列或者編碼非人動物H2-D1蛋白的Alpha-3、連接肽、胞內區和跨膜區的核苷酸序列。

10.根據權利要求9所述的構建方法，其特征在于，所述的MHC嵌合基因還包含SEQ?IDNO：16所示核苷酸序列。

11.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述MHC嵌合基因包含人B2M基因的部分，和人HLA-A2.1基因的部分；所述的人B2M基因的部分的核苷酸序列與人HLA-A2.1基因的部分的核苷酸序列通過編碼具有連接功能的接頭蛋白的核苷酸序列連接，所述的MHC嵌合基因編碼所述的MHC嵌合蛋白。

12.根據權利要求2所述的構建方法，其特征在于，所述的MHC嵌合基因的核苷酸序列如下列組中的任一種所示：

（I）SEQ?ID?NO：10或SEQ?ID?NO：65所示序列；

（II）轉錄的mRNA序列為SEQ?ID?NO：9或SEQ?ID?NO：52所示序列。