[發明專利]一種基于UPLC-ESI-MS檢測杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法

在審

• 申請號: 202110025910.5
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112684059A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 楊寧線;張明生;王道平;胡恩明;李術釵;高燕燕;彭思靜
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 貴陽易博皓專利代理事務所(普通合伙) 52116
• 代理人: 田常娟

1.一種基于UPLC-ESI-MS檢測杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)杜鵑蘭化學成分提取

杜鵑蘭假鱗莖干燥，粉碎后過篩，然后乙醇超聲提取三次，合并提取液；

(2)標準品制備

分別精密稱取秋水仙堿、大黃素甲醚、大黃酸、大黃素、槲皮素、蘆丁、齊墩果酸、肉豆蔻酸和腺苷9種標準品，加甲醇定容，用微孔濾膜過濾；

(3)待測樣品制備

將杜鵑蘭假鱗莖提取物加入色譜級甲醇超聲，并定容，過微孔濾膜進樣；

(4)色譜檢測條件

取步驟(2)中9種標準品混和液和步驟(3)待測樣品，分別采用液相色譜-質譜聯用系統和HESI-Ⅱ離子源檢測杜鵑蘭假鱗莖提取物的化學成分；

(5)化學成分的定性解析

根據杜鵑蘭假鱗莖的化學成分與9種標準品的保留時間和分子量進行比對，三年生杜鵑蘭假鱗莖含有以下9種成分：秋水仙堿、槲皮素、腺苷、蘆丁、大黃素、大黃酸、大黃素甲醚、肉豆蔻酸和齊墩果酸，其中，腺苷和秋水仙堿為陽離子模式下檢測得到，其余7種成分為陰離子模式下檢測得到。

2.根據權利要求1所述一種基于UPLC-ESI-MS測定杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法，其特征在于，步驟(1)所述乙醇為70％和55％乙醇，超聲提取3次，每次提取時間20min。

3.根據權利要求1所述一種基于UPLC-ESI-MS測定杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法，其特征在于，步驟(2)和步驟(3)所述微孔濾膜直徑為0.22μm。

4.根據權利要求1所述一種基于UPLC-ESI-MS測定杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法，其特征在于，步驟(4)所述液相系統為Dionex Ultimate 3000RSLC(HPG)(Thermo FisherScientific)，色譜柱為ThermoFisher Hypersil GOLD aQ(100*2.1mm*9μm)；梯度洗脫溶劑為含0.1％的甲酸(有機相A)和含0.1％甲醇的水(水相B)的乙腈溶液，洗脫時間及有機相配比分別為：0-2min(20％A+80％B)；3-6min(40％A+60％B)；12-20min(90％A+10％B)；20.1-25min(20％A+80％B)，流速為0.2mL/min，柱溫為40℃。

5.根據權利要求1所述一種基于UPLC-ESI-MS測定杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法，其特征在于，步驟(4)所述質譜系統為Thermo Scientific Q Exactive Focus(Thermo FisherScientific)，全質譜掃描范圍為100-1200m/z，分辨率為17500-70000，最大50-100ms，分離寬度為1.5m/z，AGC和閾值設置為1e⁶和2e⁵，動態減排為5s。

6.根據權利要求1所述一種基于UPLC-ESI-MS測定杜鵑蘭假鱗莖化學成分的方法，其特征在于，步驟(4)所述HESI-II電離方式為電噴霧離子源ESI，分別以正負離子模式檢測，其參數設定為：霧化電壓3.0kV(+)/2.5kV(-)，毛細管溫度為320℃，探針加熱溫度為350℃，保護氣體為35arb，AUX氣體為10arb，尾氣為0arb。