[發明專利]一種從土壤中篩選萊氏綠僵菌的分離培養基及制備方法

有效

• 申請號: 202110025269.5
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112592832B
• 公開（公告）日: 2022-06-21
• 發明（設計）人: 劉守柱;李學文
• 申請（專利權）人: 聊城大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 高維波

本發明公開了一種適宜于從土壤中篩選萊氏綠僵菌的分離培養基，固體，每1升培養基中，各組分及含量為：麥芽糖8?12克；蛋白胨8?12克；酵母浸出物8?12克；瓊脂粉10?15克；CTAB 0.16?0.18克。本發明不但對土壤中的細菌有效，對真菌類的雜菌也有非常好的效果，有效提高從土壤中分離萊氏綠僵菌的效率。

技術領域

本發明屬于農業病蟲害生物防治領域，具體是涉及一種從土壤中篩選萊氏綠僵菌的分離培養基及制備方法。

背景技術

生物防治是農業害蟲綜合治理中的重要措施，具有環保，安全，無公害，可操作性強等優點，也是除了化學防治之外最有效的方法。常見的生物防治方法包括對天敵昆蟲、細菌、真菌及病毒等病原物的利用等，其中，萊氏綠僵菌即是一種重要的昆蟲病原真菌。

萊氏綠僵菌(Metarhizium rileyi)，對多種害蟲有非常好的致死效果，是一種應用較為廣泛的昆蟲病原真菌，環境條件適宜時，其侵染死亡率增高，易于引起田間害蟲病害的流行從而有效地將害蟲控制在經濟損害允許水平之下。被感染的害蟲死亡后，蟲體僵化，長出白色菌絲，覆蓋蟲體，之后大量產孢，在蟲體上形成綠色霉層。M．rileyi對鱗翅目害蟲有較強的致病力，尤其是對甜菜夜蛾、斜紋夜蛾、草地貪夜蛾等夜蛾科害蟲，是一種應用前景廣闊的昆蟲生防菌。

萊氏綠僵菌一般宿存在土壤中，如何從土壤中篩選分離毒力強的致病菌株是制約萊氏綠僵菌應用的瓶頸之一。常見的分離培養基一般以抗生素（如土霉素）或殺菌劑（如多果定）等作為雜菌的抑制因子，殺滅土壤中的細菌及腐生真菌，篩選出萊氏綠僵菌。但是，抗生素只對細菌有效，多果定只對腐生真菌有效，且價格昂貴，分離效率低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種既可以抑制細菌，又可以抑制真菌，價格便宜的分離培養基，以提高土壤中萊氏綠僵菌的篩選、分離效率。

本發明的技術方案是，一種適宜于從土壤中篩選萊氏綠僵菌的分離培養基，固體，每1升培養基中，各組分及含量為：麥芽糖8-12克；蛋白胨8-12克；酵母浸出物8-12克；瓊脂粉10-15克；CTAB 0.16-0.18克。

優選的方案中，一種適宜于從土壤中篩選萊氏綠僵菌的分離培養基，固體，每1升培養基中，各組分及含量為：麥芽糖10克；蛋白胨10克；酵母浸出物10克；瓊脂粉12克；CTAB0.17克。

前面所述萊氏綠僵菌分離培養基的制備方法，步驟如下：

（1）準確稱取麥芽糖10克、蛋白胨10克、酵母浸出物10克、瓊脂粉12克，混勻后置于500毫升燒杯中，然后加入200毫升蒸餾水，用磁力攪拌器攪拌10分鐘，至各組分溶解均勻；

（2）稱取CTAB 0.17克置于燒杯中，加入100毫升蒸餾水進行溶解，至無色透明為止；

（3）把CTAB溶液與步驟1所得的培養液混合，攪拌均勻后定容至1升，用500毫升玻璃試劑瓶（耐高壓試劑瓶）分裝，121度高壓滅菌20分鐘后倒平板，冷卻凝固后作為篩選萊氏綠僵菌的分離培養基。

本發明與現有技術相比，其技術優勢體現在：

1 本發明不但對土壤中的細菌有效，對真菌類的雜菌也有非常好的效果，有效提高從土壤中分離萊氏綠僵菌的效率。

2 CTAB價格便宜，方便易得，降低了經濟成本。

附圖說明

圖1 Metarhizium rileyi在本發明培養基上的分離效果；

圖2 Metarhizium rileyi在SMAY（對照）培養基上的分離效果。

具體實施方式