[發明專利]一種可重復利用的固定化酶制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202110024689.1
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112574983B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發明（設計）人: 游力軍;丁冠軍;施鑫明
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12N11/10
• 分類號: C12N11/10;C12N11/14;C12N11/089;C12N9/02;C08G81/00;C02F3/34;C02F101/34
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 饒文君;蔡學俊

1.一種可重復利用的固定化酶制備方法，其特征在于：所述固定化酶為固定化辣根過氧化物酶，其由磁性聚乙烯亞胺接枝交聯殼聚糖復合材料固定化制備而成。

2.根據權利要求1所述一種可重復利用的固定化酶制備方法，其特征在于：所述聚乙烯亞胺接枝殼聚糖復合材料呈現三元網絡互穿結構。

3.根據權利要求1所述一種可重復利用的固定化酶制備方法，其特征在于：所述方法如下：

(1) 將殼聚糖、四水合氯化亞鐵和六水合氯化鐵利用超聲在溶劑中分散均勻，控制反應溫度和反應時間，殼聚糖在交聯劑存在下形成分子鏈，并對成核生長的磁性納米粒子包合，從而形成三元網絡互穿復合物，繼續加入聚乙烯亞胺到復合物中進行攪拌后，磁性分離產物，并分別用乙醇和去離子水清洗3次，得到高氨基的聚乙烯亞胺接枝殼聚糖磁性多孔固定化酶復合載體；

(2) 將步驟(1)處理后的復合載體材料加入辣根過氧化物酶溶液中，并加入20~50 wt%戊二醛溶液中進行活化，置于25~50 ℃恒溫振蕩器中，反應1~8 h后取出，依次用去離子水和PBS緩沖液進行洗滌；得到固定化辣根過氧化物酶。

4.根據權利要求3所述一種可重復利用的固定化酶制備方法，其特征在于：步驟(2)中PBS緩沖液的pH為7.0。

5. 根據權利要求3所述一種可重復利用的固定化酶制備方法，其特征在于：所述方法具體如下：

(1)合成聚乙烯亞胺接枝殼聚糖磁性多孔固定化酶復合載體

將0.1~4.0 g 四水合氯化亞鐵和0.1~8.0 g六水合氯化鐵溶于50 mL的水中，超聲15min使其完全溶解，獲得均勻介質，將0.5~3.0 g的脫乙酰殼聚糖溶解在40 mL體積分數為3.0％的乙酸中，并將所制備的脫乙酰殼聚糖-乙酸溶液加入到均勻介質中；200 rpm機械攪拌1 h，通入氮氣后加熱到40~90 ℃，之后加入1.0~50 mL 1.0 mol/L氫氧化鈉溶液，0.1~5.0 mL 50 wt%戊二醛溶液和0.5~3.0 g聚乙烯亞胺，交聯反應0.5~4.0 h；用冷水終止反應，并用1 mol/L鹽酸溶液調節pH至中性，產物用外加磁場分離后，分別用乙醇和去離子水清洗3次，冷凍干燥；

(2)辣根過氧化物酶的固定化過程：

取10~200 mg步驟(1)得到的復合載體材料加入10mL 0.1~2.0 mg/mL辣根過氧化物酶溶液中，并加入0.1~1000 μL 20-50 wt%戊二醛溶液進行活化，置于25~50 ℃恒溫振蕩器中，反應1~8 h后取出，依次用去離子水和PBS緩沖液進行洗滌；得到固定化辣根過氧化物酶。

6.一種如權利要求1-5任一所述方法制得的固定化辣根過氧化物酶。

7.一種如權利要求6所述固定化辣根過氧化物酶的應用，其特征在于：應用于酚類化合物的催化降解。