[發明專利]一種引物組合物、測序試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 202110024096.5
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112593015B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 張櫻;何昆侖;吳婷婷;潘世讓;張思文;韓悅;王洋;梁羽;汪德鵬
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍總醫院第一醫學中心;北京希望組生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6869;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京市京師律師事務所 11665
• 代理人: 高曉麗

本方案公開了一種引物組合物，該組合物包括如A)，B)和C)所示的引物組合物中的一組或幾組引物組合物：A)第一組引物組合物，包括多個用于檢測引起呼吸道感染的病毒病原體的引物對；B)第二組引物組合物，包括多個用于檢測引起呼吸道感染的細菌病原體的引物對；C)16S引物對，用于與所述第一組引物組合物和/或第二組引物組合物同時檢測引起呼吸道感染的病原體。該試劑盒基于三代高通量測序技術，可以檢測30余種呼吸道病原體，可以簡化呼吸道感染病原體的篩查過程，提高對病原體的快速精準判斷。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，特別涉及一種引物組合物、測序試劑盒及檢測方法。

背景技術

呼吸道感染是臨床上較為常見的感染性疾病，尤其是在嬰幼兒、老人及免疫缺陷病人中，常常導致嚴重的癥狀甚至死亡。常見的呼吸道感染病原體包括病毒、細菌、支原體、衣原體等微生物。而這些微生物在自然界中可以寄生在動植物和人身上，對人類的健康造成威脅。病毒性病原體主要包含有甲型流感病毒、乙型流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、偏肺病毒、腺病毒等。細菌性病原體有肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌等。大多數呼吸道感染具有相似的臨床癥狀，很難通過臨床癥狀快速準確的判斷病原體，快速準確鑒定呼吸道感染的病原體對于針對性用藥具有重要意義。傳統的呼吸道病原體檢測技術主要包括細菌和病毒培養、抗原抗體反應、免疫熒光、普通PCR等檢測技術手段，這些技術都存在一定缺陷：細菌培養周期較長，要求較高，不能滿足短時間快速檢測的要求；抗原抗體反應靈敏度和特異度較低，容易出現假陽性；普通凝膠電泳的靈敏度低，有時條帶模糊，判斷不夠準確，極易造成誤診。

發明內容

本方案的一個目的在于提供一種引物組合物，通過使用該引物組合物并基于三代高通量測序技術，可以檢測30余種呼吸道病原體，簡化呼吸道感染病原體的篩查過程，提高對病原體的快速精準判斷。

本方案的另一個目的在于提供一種含有上述引物組合物的測序試劑盒。

本方案的第三個目的在于提供一種檢測引起呼吸道感染的病原體的方法。

為實現上述目的，本方案如下：

一種引物組合物，該組合物包括如A)，B)和C)所示的引物組合物中的一組或幾組引物組合物：

A)第一組引物組合物，包括多個用于檢測引起呼吸道感染的病毒病原體的引物對；

B)第二組引物組合物，包括多個用于檢測引起呼吸道感染的細菌病原體的引物對；

C)16S引物對，用于與所述第一組引物組合物和/或第二組引物組合物同時檢測引起呼吸道感染的病原體；

其中，所述第一組引物組合物包括18對引物中的一對或多對，所述18對引物分別具有如SEQ ID NO.1至SEQ ID NO.18所示的上游引物序列和如SEQ ID NO.19至SEQ IDNO.36 所示的下游引物序列；

所述第二組引物組合物包括14對引物中的一對或多對，所述14對引物分別具有如SEQ ID NO.37至SEQ ID NO.50所示的上游引物序列和如SEQ ID NO.51至SEQ ID NO.64所示的下游引物序列；

所述16S引物對包含具有如SEQ ID NO.65所示的上游引物序列和如SEQ ID NO.66所示的下游引物序列。

優選的，所述組合物中第一組引物組合物中各引物含量相同。

優選的，所述組合物中第二組引物組合物中各引物的含量相同。

優選的，當所述組合物包含16S引物對和第一組引物組合物和/或第二組引物組合物時，引物組合物中的全部引物對的含量相同。

第二方面，本方案提供一種測序試劑盒，所述試劑盒包括如上任一項所述的引物組合物。