[發明專利]一種異源表達鹵化酶的純化方法在審
| 申請號： | 202110017687.X | 申請日： | 2021-01-07 |
| 公開（公告）號： | CN112481225A | 公開（公告）日： | 2021-03-12 |
| 發明（設計）人： | 王苗;李昱良;劉建國;王倩;任群利;胡歡;李小蘭 | 申請（專利權）人： | 遵義醫科大學 |
| 主分類號： | C12N9/02 | 分類號： | C12N9/02;C07K19/00;C07K1/22;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 遵義市創先知識產權代理事務所(普通合伙) 52118 | 代理人： | 劉創先 |
| 地址： | 563000 貴*** | 國省代碼： | 貴州;52 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 表達 鹵化 純化 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種異源表達鹵化酶的純化方法，其特征是：所述鹵化酶序列如SEQ ID NO.1所示，包含以下步驟：
a）. 構建鏈霉菌鹵化酶異源表達菌株pET-abxH R，培養誘導收集菌體；
b）. 非變性條件下抽提His標簽蛋白：
（1）準備細胞，接種，誘導表達，收集細胞；
（2）加入1/20細胞生長體積的NTA-0 Buffer和PMSF，PMSF使用的工作濃度為1mM現用現加；
（3）將細胞懸浮，加入適量溶菌酶，混勻，冰上放置30min，冰上超聲或勻漿破碎細胞；
（4）加入10%Triton X-100, 使終濃度為0.05%，充分混勻，冰上放置15min；
（5）12000 rpm，4℃，離心15min，取上清置于冰上備用或-20℃保存；
（6）將NTA樹脂裝入合適的層析柱，層析用10倍NTA體積的NTA-0 buffer沖洗；
（7）將樣品加至NTA層析柱中，流速控制在15mL/h左右，分別用NTA-20、NTA-40、NTA-60、NTA-80、NTA-100、NTA-200、NTA-300、NTA-400 buffer洗脫，流速控制在15mL/h左右，收集洗脫液，每管收集一個NTA體積；
（8）收集的洗脫液，SDS-PAGE蛋白質電泳分析蛋白的結合情況，純化的目標蛋白質的保存條件根據蛋白質的性質和用途確定。
下載完整專利技術內容需要扣除積分，VIP會員可以免費下載。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于遵義醫科大學，未經遵義醫科大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/202110017687.X/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
