[發(fā)明專利]R1R6基因型蘋果作為受體材料在制備紅肉轉基因蘋果中的應用

有效

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• 申請日: 2021-01-07
• 公開（公告）號: CN112831520B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發(fā)明（設計）人: 劉文軍;王楠;陳學森;房鴻成;于蕾;李志強;毛志泉
• 申請（專利權）人: 山東農業(yè)大學
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H6/74;A01H5/12;A01H5/08;A01H1/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 何葉喧

本發(fā)明公開了R1R6基因型蘋果作為受體材料在制備紅肉轉基因蘋果中的應用。本發(fā)明提供了R1R6基因型蘋果作為受體材料在制備轉基因蘋果中的應用。本發(fā)明還提供了蘋果(Malus sp.)BCF2作為受體材料在制備轉基因蘋果中的應用。本發(fā)明還提供了一種制備轉基因蘋果的方法，包括如下步驟：蘋果(Malus sp.)BCF2作為受體材料進行遺傳轉化，得到轉基因蘋果。本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現，以“紫紅一號”蘋果和“嘎啦”蘋果為親本得到的F2代中，基因型為R1R6的株系更容易得到組培苗，且作為遺傳轉化受體具有更高的轉化效率，其中G2株系的轉化率最高。本發(fā)明對于轉基因紅肉蘋果的創(chuàng)制具有重大的應用價值。

技術領域

本發(fā)明涉及R1R6基因型蘋果作為受體材料在制備紅肉轉基因蘋果中的應用。

背景技術

蘋果是我國落葉果樹的第一大樹種，據2016年統(tǒng)計數據顯示，我國蘋果栽培面積和產量分別達到246.69萬hm2和4388.23萬t，居世界首位，是世界上最大的蘋果資源、生產和消費國。蘋果耐貯性好，供應周期長，其果實含有較高比例的、人體比較容易吸收的游離多酚，具有很好的抗氧化、抗腫瘤、預防心腦血管疾病及保肝等作用，營養(yǎng)保健價值高。

近幾年，隨著蘋果全基因組測序的完成，國內外有關蘋果的基礎研究取得了長足的進步，越來越多的與蘋果產量、抗性、品質、發(fā)育等相關的功能基因被克隆、鑒定。但是，受限于轉基因蘋果材料極難獲得，很多基因的功能無法得到全面的驗證。目前，國內外用于轉基因功能驗證的蘋果材料僅有一個‘嘎啦’的組培苗‘GL3’，其轉化效率較低。此外，‘嘎啦’的組培苗‘GL3’屬于普通白肉蘋果，果肉中的類黃酮、花青苷等營養(yǎng)保健成分極低，不適于開展相關研究。國內外仍未有可用于基因編輯的紅肉蘋果組培苗。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供R1R6基因型蘋果作為受體材料在制備紅肉轉基因蘋果中的應用。

本發(fā)明提供了R1R6基因型蘋果作為受體材料在制備轉基因蘋果中的應用。

本發(fā)明還提供了R1R6基因型蘋果作為轉基因受體材料在蘋果育種中的應用。

本發(fā)明還提供了一種制備轉基因蘋果的方法，包括如下步驟：將R1R6基因型蘋果作為受體材料進行遺傳轉化，得到轉基因蘋果。

所述R1R6基因型蘋果為從F2代蘋果中篩選得到的；

所述F2代蘋果為F1代蘋果的后代；

所述F1代蘋果為“紫紅一號”蘋果和“嘎啦”蘋果的雜交后代；

篩選R1R6基因型蘋果的方法如下：以蘋果的基因組DNA為模板，采用序列表的序列1所示的引物R6F和序列表的序列2所示的引物R6R組成的引物對進行PCR擴增，如果得到大小分別為483-503bp和382-402bp的兩種擴增產物，待測蘋果為R1R6基因型蘋果。

所述F2代蘋果為F1代蘋果的直接后代，即第一代后代。

所述F2代蘋果為F1代蘋果自然授粉得到的后代。

所述F1代蘋果為“紫紅一號”蘋果和“嘎啦”蘋果的直接雜交后代，即第一代后代。

“紫紅一號”蘋果作為父本，“嘎啦”蘋果作為母本。

所述蘋果的基因組DNA具體可為蘋果的葉片的基因組DNA。

所述轉基因蘋果為紅肉轉基因蘋果。紅肉轉基因蘋果為葉片總類黃酮含量為2000mg/kg以上的轉基因蘋果。

所述轉基因蘋果為高類黃酮含量的轉基因蘋果。高類黃酮含量的轉基因蘋果為葉片總類黃酮含量為2000mg/kg以上的轉基因蘋果。

所述蘋果育種為紅肉蘋果育種。紅肉蘋果為葉片總類黃酮含量為2000mg/kg以上的蘋果。