[發明專利]一種用于花生耐鹽體篩選的培養基以及篩選花生耐鹽體的方法

有效

• 申請號: 202110015992.5
• 申請日: 2021-01-07
• 公開（公告）號: CN112616673B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 隋炯明;杜國寧;相杰;朱虹;李奇巖;趙春梅;鄭春花;唐艷艷;王晶珊;喬利仙
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 肖太升;高洋

本發明公開了一種用于花生耐鹽體篩選的培養基以及篩選花生耐鹽體的方法，屬于花生抗逆性育種技術領域。本發明用于花生耐鹽體篩選的培養基，包括體胚誘導培養基和體胚萌發及耐鹽定向篩選培養基；其中，所述體胚萌發及耐鹽定向篩選培養基中添加有終濃度為15g/L的NaCl。采用本發明的培養基進行花生耐鹽體的篩選，有利于加快育種進程，提高耐鹽體的存活率，節省大量的人力、物力、財力。

技術領域

本發明屬于花生抗逆性育種技術領域，具體涉及一種用于花生耐鹽體篩選的培養基以及篩選花生耐鹽體的方法。

背景技術

花生是重要的油料作物和經濟作物，在我國農業生產乃至整個國民經濟中具有重要地位。鹽堿等非生物脅迫抑制了花生的生長，導致植株萎蔫、莢果產量降低、品質變劣。隨著環境的不斷惡化，鹽堿等逆境脅迫已經成為世界性的問題，培育具有多種抗逆性的作物新品種已成為廣大育種家研究的主要目標之一。然而花生缺乏耐鹽資源，利用常規雜交方法難以選育出耐鹽品種。

因此高產耐鹽品種的選育一直是一個難以解決的問題。花生耐鹽體在正常花生中的發生率極低，因而為了篩選獲得耐鹽苗，則需要建立足夠大的樣本；大的篩選群體則會帶來大量的人力、物力和財力的消耗。因而，亟需一種可以加快育種進程，降低人力、物力和財力的花生耐鹽體的篩選方法。

發明內容

針對現有技術中存在的問題，本發明的目的在于提供一種用于花生耐鹽體篩選的培養基以及篩選花生耐鹽體的方法，有利于花生耐鹽性品種的篩選，加快育種進程，提高耐鹽體的存活率。

為了達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種用于花生耐鹽體篩選的培養基，包括體胚誘導培養基和體胚萌發及耐鹽定向篩選培養基；

所述體胚誘導培養基是在MS培養基中添加2,4-D，使其終濃度為6mg/L；

所述體胚萌發及耐鹽定向篩選培養基是在MS培養基中添加NaCl和6-芐氨基嘌呤，且使NaCl和6-芐氨基嘌呤的終濃度分別為15g/L、5mg/L。

一種篩選花生耐鹽體的方法，使用上述培養基進行篩選。

在上述方案的基礎上，所述篩選花生耐鹽體的方法，步驟如下：

(1)選取籽粒飽滿的花生種子，去子葉保留種胚，將種胚用蒸餾水浸泡10-12小時；

(2)將浸泡后的種胚置于75％的酒精浸泡20s，再用0.1％的升汞浸泡l0min，進行表面消毒，用無菌水漂洗5次；

(3)將經表面消毒的種胚，置于無菌培養皿中分離胚小葉，然后接種到添加體胚誘導培養基上培養4w，誘導體胚的形成；

(4)將形成體胚的外植體轉移到體胚萌發及耐鹽定向篩選培養基中促使體胚萌發，并進行定向篩選耐鹽體，直至成苗；

(5)無菌嫁接后進行移栽

待篩選獲得的耐鹽體生長至2cm，從基部切下作為接穗，以無菌萌發11-13天的花生實生苗為砧木進行無菌嫁接；嫁接苗無菌培養4天后，移栽于育苗基質中，然后放置到人工氣候室內，溫度為19～23℃、光照強度為1500～2000Lx，濕度為80-90％。

本發明技術方案的優點：

花生耐鹽體在正常花生中的發生率極低，因而為了篩選獲得耐鹽苗，則需要建立足夠大的樣本；大的篩選群體則會帶來大量的人力、物力和財力的消耗。

本發明利用組織培養定向篩選耐鹽體，在培養基中添加NaCl進行篩選，本發明所采用的NaCl濃度適宜，對體胚的萌發具有一定的抑制作用，而又不會完全抑制導致體胚死亡；該篩選方法可以在育種的早期進行篩選，培育成苗的樣本量，可節省大量的人力、物力、財力。