[發明專利]檢測NG淋病奈瑟菌的引物和試劑盒

在審

• 申請號: 202110015657.5
• 申請日: 2021-01-07
• 公開（公告）號: CN112725476A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 孫翠蓮
• 申請（專利權）人: 武漢艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6869;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/36
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 黎雙華

本發明公開了檢測NG淋病奈瑟菌的引物，其特征在于，所述引物包括：擴增NG淋病奈瑟菌的擴增引物和測序引物，測序引物與擴增引物相同；其堿基序列為：NG F1：GATGACTTACCTGCCGCTGTT；NG R1：TTGCCTTACTTACTCCGCCATT。本發明具有高敏感，高特異和短檢測窗口期等優點，同時相比較熒光定量PCR法，可以鑒定細菌變異情況，同時避免因細菌變異導致的漏檢發生。

技術領域

本發明屬于生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測NG淋病奈瑟菌的引物和試劑盒。

背景技術

淋病奈瑟菌(Niesseria gonorrhoese，NG)1879年由Neisser發現，簡稱為淋球菌，是引起淋病的病原體，屬奈瑟菌屬。淋病奈瑟菌為革蘭陰性雙球菌，無鞭毛或芽孢，有菌毛和莢膜，需氧，具有氧化酶和觸酶。致病因素有菌毛、莢膜、外膜蛋白、IgA蛋白酶和脂多糖等。傳統的病原體檢測方法包括涂片法、細菌培養、免疫學技術等普遍存在檢出率低、周期長、特異性差等缺點，給臨床診斷帶來困難。NG主要通過直接涂片鏡檢和培養的方法進行鑒定。但目前一些患者存在著不規則用藥等現象，而且臨床還出現少量對于培養基中萬古霉素敏感的菌株，因此作為“金標準”的培養方法也可能出現假陰性。

淋病奈瑟菌基因組長2.154Mb，一般基因檢測的靶基因可為其隱蔽性質粒，染色體基因，抗淋球菌胞嘧啶DNA甲基轉移酶基因，透明蛋白基因，菌毛DNA，rRNA和porA假基因。

通過一代測序法檢測，可以對奈瑟菌高度保守區域進行特異性片段擴增，對擴增產物進行測序，測序數據與標準序列比對，以鑒定是否為淋病奈瑟菌，以及其變型情況進行鑒定。

發明內容

鑒于核酸檢測是直接檢測病原體核酸，具有高敏感，高特異和短檢測窗口期等優點，同時一代測序相對熒光定量PCR法，可以鑒定細菌變異情況，同時避免因細菌變異導致的漏檢發生。本發明提供了一種一代測序檢測NG淋病奈瑟菌的引物和試劑盒，用于檢測淋病奈瑟菌核酸。

一種檢測NG淋病奈瑟菌的引物，其特征在于所述引物包括：擴增NG淋病奈瑟菌的擴增引物和測序引物，測序引物與擴增引物相同；其堿基序列為：

NG F1：GATGACTTACCTGCCGCTGTT

NG R1：TTGCCTTACTTACTCCGCCATT。

供檢測NG淋病奈瑟菌的方法，包括以下步驟：

(1)用PCR擴增已提取的DNA；

(2)對步驟1中的擴增產物進行測序；

(3)對測序結果進行判斷，鑒定NG淋病奈瑟菌；

本發明的第二個目的是提供一種檢測NG淋病奈瑟菌的試劑盒，所述試劑盒包括檢測體系PCR擴增反應液、測序體系反應液，其特征在于，所述檢測體系PCR擴增反應液包括一對擴增引物NG F1、NG R1，所述測序體系反應液包括一對測序引物NG F1、NG R1，其序列均為：

NG F1：GATGACTTACCTGCCGCTGTT

NG R1：TTGCCTTACTTACTCCGCCATT。。

進一步地，所述檢測體系PCR擴增反應液還包括10×PCR Buffer；2mM dNTPs；KODFX DNA Polymerase(1U/μl)。

進一步地，所述測序體系反應液還包括測序純化液、EDTA、無水乙醇、75％乙醇、HIDI(高度去離子甲酰胺)。

進一步地，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品；陽性對照品含NG陽性質粒，序列如下：