[發明專利]一種通過小麥TaMTL基因敲除突變體誘導的小麥單倍體植株篩選方法

在審

• 申請號: 202110015401.4
• 申請日: 2021-01-05
• 公開（公告）號: CN112680539A
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 葉興國;唐華麗;王軻;劉會云;林志珊;賈子苗;杜麗璞;邱玉亮;石磊;梁小娜
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院作物科學研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;A01H1/02
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 張如佳

1.一種鑒別或輔助鑒別待測小麥是否為單倍體小麥的方法，為檢測待測小麥的基因組DNA中是否含有bar基因和/或Cas9基因；

如果待測小麥的基因組DNA中不含有bar基因和Cas9基因，則所述待測小麥為單倍體小麥或候選為單倍體小麥；

如果待測小麥的基因組DNA中含有bar基因和/或Cas9基因，則所述待測小麥為非單倍體小麥或候選為非單倍體小麥；

所述bar基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示；

所述Cas9基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：2所示。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述檢測待測小麥的基因組DNA中是否含有bar基因和/或Cas9基因的方法為如下(1)或(2)：

(1)測序；

(2)用引物組合物分別對待測小麥樣品進行PCR擴增；

所述引物組合物由引物對A和引物B組成；

所述引物對A由引物1和引物2組成；

所述引物1為如下a1)或a2)：

a1)SEQ ID NO：3所示的單鏈DNA分子；

a2)將a1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與a1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物2為如下b1)或b2)：

b1)SEQ ID NO：4所示的單鏈DNA分子；

b2)將b1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與b1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物對B由引物3和引物4組成；

所述引物3為如下c1)或c2)：

c1)SEQ ID NO：5所示的單鏈DNA分子；

c2)將c1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與c1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物4為如下d1)或d2)：

d1)SEQ ID NO：6所示的單鏈DNA分子；

d2)將d1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與d1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子。

3.一種鑒別或輔助鑒別待測小麥是否為單倍體小麥的方法，包括如下步驟：以待測小麥的基因組DNA為模板，利用引物對A和引物對B進行PCR擴增，檢測擴增產物的大小，根據擴增產物的大小按照下述方法確定所述待測小麥是否為單倍體小麥：

如果所述擴增產物中含有大小為430bp和/或706bp的條帶，所述待測小麥樣品為非單倍體小麥或候選為非單倍體小麥；

如果所述擴增產物中不含有大小為430bp和706bp的條帶，所述待測小麥樣品為單倍體小麥或候選為單倍體小麥；

所述引物對A由引物1和引物2組成；

所述引物1為如下a1)或a2)：

a1)SEQ ID NO：3所示的單鏈DNA分子；

a2)將a1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與a1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物2為如下b1)或b2)：

b1)SEQ ID NO：4所示的單鏈DNA分子；

b2)將b1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與b1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物對B由引物3和引物4組成；

所述引物3為如下c1)或c2)：

c1)SEQ ID NO：5所示的單鏈DNA分子；

c2)將c1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與c1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子；

所述引物4為如下d1)或d2)：

d1)SEQ ID NO：6所示的單鏈DNA分子；

d2)將d1)限定的單鏈DNA分子進行一個或幾個堿基的缺失、插入和/或改變得到的與d1)限定的單鏈DNA分子具有相同功能的單鏈DNA分子。

4.利用權利要求1-3任一所述的方法鑒別獲得的單倍體小麥在小麥育種和/或功能基因組研究中的應用。