[發明專利]一種重組角蛋白分離純化方法

在審

• 申請號: 202110014907.3
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112646045A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 查國棟;余鋇
• 申請（專利權）人: 海默斯（重慶）醫學生物技術有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/18;C07K1/36
• 代理公司: 重慶中興達啟創專利代理事務所(普通合伙) 50264
• 代理人: 毛新民

1.一種重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將表達重組角蛋白的大腸桿菌進行發酵，然后再將發酵后的大腸桿菌菌液離心獲得菌泥，再將菌泥溶解于緩沖液后進行高壓勻漿后，再進行離心收集上清液，最后對上清液進行過濾得到含有重組角蛋白的濾液；

2)采用Ni親和層析柱對步驟1)中得到含有重組角蛋白的濾液進行分離，收集含重組角蛋白的洗脫緩沖液；

3)采用陰離子層析柱對步驟2)得到的含重組角蛋白的洗脫緩沖液進行二次分離，收集二次洗脫緩沖液。

2.根據權利要求1所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟1)中溶解菌泥的緩沖液為5-100mM PB緩沖液或者Tris pH7.0。

3.根據權利要求1或2所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟1)中高壓勻漿的壓力為800～2000Bar，高壓勻漿3～5次。

4.根據權利要求3所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟1)中采用冷凍高速離心機收集上清液，所述冷凍高速離心機的分離轉速為8000～12000r/min，分離溫度為4℃，分離時間為10min。

5.根據權利要求1或4任一所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟1)中采用0.22um中空纖維或者濾膜過濾上清液。

6.根據權利要求5所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟2)的具體操作為：取裝有Ni親和層析介質的層析柱，用純水處理層析柱后，用平衡緩沖液平衡層析柱后上樣，再用清洗緩沖液清洗雜質，用洗脫緩沖液進行洗脫，收集含重組角蛋白的洗脫緩沖液；最后用0.5M NaOH溶液清洗結合能力強的雜質，用20％乙醇保存層析柱。

7.根據權利要求6所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟3)的具體操作為：取裝有陰離子層析介質的層析柱，用純水處理層析柱，之后用平衡緩沖液平衡層析柱后上樣，再用清洗緩沖液清洗雜質，最后用洗脫緩沖液進行洗脫，收集含有重組角蛋白的洗脫緩沖液；用0.5M NaOH溶液清洗結合能力強的雜質，用20％乙醇保存層析柱。

8.根據權利要求6所述的重組角蛋白分離純化方法，其特征在于，所述步驟2)中Ni親和層析柱中的介質為Ni SMart Beads 6FF、Ni NTA Beads 6FF、Ni-TED Purose 6Fast Flow、Ni-TED Purose 6FF或Ni Sepharose 6Fast Flow中的一種；

所述步驟2)中平衡緩沖液為5-100mM PB緩沖液或者Tris+8M Urea pH8.0；

所述步驟2)中清洗緩沖液為5-100mM PB緩沖液或者Tris+8M Urea pH8.0；

所述步驟2)中洗脫緩沖液為5-100mM PB緩沖液或者Tris+8M Urea pH8.0+50-500mM咪唑；

所述步驟2)中平衡緩沖液平衡層析柱至流出液的紫外吸收值與平衡緩沖液的紫外吸收值保持一致。