[發明專利]一種用于疤痕修復的自體脂肪源干細胞的提取方法

在審

• 申請號: 202110014130.0
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112646776A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發明（設計）人: 占震鋒;李慶靜
• 申請（專利權）人: 上海南濱江細胞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K35/28;A61P17/02
• 代理公司: 合肥正則元起專利代理事務所(普通合伙) 34160
• 代理人: 劉生昕

本發明公開了一種用于疤痕修復的自體脂肪源干細胞的提取方法，該用于疤痕修復的自體脂肪源干細胞的提取方法包括采集脂肪組織液、分離脂肪顆粒、破碎脂肪顆粒、原代培養以及傳代培養等步驟，提取到的自體脂肪源干細胞具有良好的分化增殖能力，可促進機體自我脂肪細胞的分裂更新，加快面部疤痕的修復，使細胞保持良好的生長狀態，以及旺盛的增殖活力，滿足疤痕治療的需要，且是機體自生細胞增殖修復的過程不具有副作用，有效解決了現階段對于疤痕修復常采用修復膏、修復液、修復貼等方式，存在大多數的修復產品不同程度地存在著化學成分過多、見效慢、產品價格昂貴，且取得的成效并不一定很好的問題。

技術領域

本發明涉及疤痕修復技術領域，具體為一種用于疤痕修復的自體脂肪源干細胞的提取方法。

背景技術

自體干細胞是一類具有自我復制能力的多潛能細胞，在一定條件下，它可以分化成多種APSC多能細胞，是一類具有自我復制和多向分化潛能的原始細胞。自體干細胞是一種未充分分化，尚不成熟的細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能，改變了人類疾病的應對方法，醫學界稱為“萬用細胞”。自體干細胞是一種“種子細胞”，動物體就是通過自體干細胞的分裂來實現細胞的更新，從而保證動物體持續生長發育的。當遭遇疾病，某一器官罷工或受傷時，自體干細胞會第一時間作出反應，促進分化成身體所需的專屬細胞，從而提供足夠數量的專屬細胞幫助修復和愈合。在神經系統疾病、免疫系統疾病等諸多疾病的治療有著廣泛的應用。

現階段對于疤痕修復常采用修復膏、修復液、修復貼等方式，存在大多數的修復產品不同程度地存在著化學成分過多、見效慢、產品價格昂貴，且取得的成效并不一定很好的缺點。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了一種用于疤痕修復的自體脂肪源干細胞的提取方法，用于解決現階段對于疤痕修復常采用修復膏、修復液、修復貼等方式，存在大多數的修復產品不同程度地存在著化學成分過多、見效慢、產品價格昂貴，且取得的成效并不一定很好的問題。

(二)技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：一種用于疤痕修復的自體脂肪源干細胞的提取方法，具體包括如下步驟：

步驟S1：選擇患者機體一處部位作為抽取脂肪的部位并進行標記，使用局麻腫脹液處理該部位，局麻腫脹處理完畢后，使用50mL注射器與4mm吸脂針沿著皮膚切口的方向插入皮下脂肪組織，吸取50mL脂肪組織液；

步驟S2：將帶有脂肪組織液的注射器置于4-6℃條件下，置于500mL生理鹽水中，靜置10-15min，排出最下層，然后將剩余液體轉移至50mL離心管，置于冷凍高速離心機，在溫度4℃，轉速1000-1200r/min條件下，離心5min，離心結束后取上層，得到脂肪顆粒；

步驟S3：將步驟S2得到的脂肪顆粒置于50mL注射器，使用雙通道乳糜器，分別經過3孔、5孔、9孔經過8次反復推送，乳糜破碎后，將破碎后的脂肪顆粒加入燒杯，然后加入生理鹽水和正泰霉素，轉速50r/min混合攪拌3-5min，然后轉移至50mL離心管中，置于高速離心機中，在溫度4℃，轉速2000-2500r/min條件下，離心8-10min，離心結束后，取最下層，得到初提液；

步驟S4：將步驟S3得到的初提液加入PBS緩沖液與含有人自體血清的DMEM培養基中，置于二氧化碳培養箱，在30-37℃條件下培養5-7天，得到原代細胞；

步驟S5:5-7天后，融合度到達70％-80％時，使用500mLPBS緩沖液沖洗2次，然后加入胰酶和EDTA消化液，加入含有人自體血清的DMEM培養基，將細胞密度稀釋3-4倍，置于二氧化碳培養箱在35-37℃條件下，培養5-7天，培養結束后加入生理鹽水，轉移至50mL離心管中，再置于高速冷凍離心機，在4℃，1500-2000r/min條件下離心5-8min，離心結束后，取上清液，即為自體脂肪源干細胞。