[發明專利]一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物、制備及應用

在審

• 申請號: 202110013330.4
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112587720A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 史軍;薛玲玲;鄭云文
• 申請（專利權）人: 浙江衛未生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: A61L27/12
• 分類號: A61L27/12;A61L27/20;A61L27/38;A61L27/50;A61L27/52;A61L27/54;A61L27/60
• 代理公司: 北京沁優知識產權代理有限公司 11684
• 代理人: 田婕

1.一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，所述混合物包括臍帶間充質干細胞外泌體、CGF和磷酸鹽溶液，所述的臍帶間充質干細胞外泌體、CGF和磷酸鹽溶液的體積比為2:(0.5～1):(2～4)。

2.根據權利要求1所述的一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，所述混合物還包括透明質酸，所述的臍帶間充質干細胞外泌體、CGF、磷酸鹽溶液和透明質酸的體積比為2:(0.5～1):(2～4):1。

3.根據權利要求1或2所述的一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞外泌體的濃度為3μg/ml～8μg/ml。

4.根據權利要求1或2所述的一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，所述CGF的濃度為40ng/ml～120ng/ml。

5.根據權利要求1或2所述的一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，分泌所述臍帶間充質干細胞外泌體的臍帶間充質干細胞是通過采用含有臍靜脈內皮細胞外泌體的培養基培養同源臍帶間充質干細胞獲得。

6.根據權利要求5所述的一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞是用miR-525-3p過表達腺病毒感染修飾的miR-525-3p高表達臍帶間充質干細胞。

7.根據權利要求6所述的一種CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物，其特征在于，所述臍帶間充質干細胞外泌體是通過采用含有VCAM1試劑的培養基培養所述miR-525-3p高表達臍帶間充質干細胞獲得。

8.一種如權利要求7所述的CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物的制備方法，其特征在于，包括以下制備步驟：

步驟(1)：將臍帶剪切并分離，得到臍動脈、臍靜脈和臍帶膠質；

步驟(2)：將步驟(1)中得到的臍靜脈，采用0.1％Ⅰ型膠原酶臍帶靜脈灌注消化法，分離得到臍靜脈內皮細胞，取臍靜脈內皮細胞的培養上清液，采用超速離心法，分離、提取得到臍靜脈內皮細胞外泌體；

步驟(3)：將步驟(2)中得到的臍靜脈內皮細胞外泌體，加入至DMEM-F12培養基中，得到含有臍靜脈內皮細胞外泌體的DMEM-F12培養基；

步驟(4)：將步驟(1)中得到的臍帶膠質剪碎成組織塊，并加入至步驟(3)得到的含有臍靜脈內皮細胞外泌體的DMEM-F12培養基中進行培養，得到第2代臍帶間充質干細胞；

步驟(5)：用miR-525-3p過表達腺病毒感染步驟(4)得到的第2代臍帶間充質干細胞得到miR-525-3p高表達臍帶間充質干細胞；

步驟(6)：將VCAM1試劑加入至DMEM-F12培養基中，得到含有VCAM1試劑的DMEM-F12培養基；

步驟(7)：將步驟(5)得到的miR-525-3p高表達臍帶間充質干細胞接種至步驟(6)得到的含有VCAM1試劑的DMEM-F12培養基中進行培養，取miR-525-3p高表達臍帶間充質干細胞的培養上清液，采用超速離心法，分離、提取得到臍帶間充質干細胞外泌體；

步驟(8)：采集靜脈血進行差速離心，自上而下分為血清層、CGF層、分離膠層、紅細胞層，吸取CGF層的液體，得到CGF液體；

步驟(9)：將步驟(7)得到的臍帶間充質干細胞外泌體與步驟(8)得到的CGF液體分別加入至磷酸鹽溶液中，混合均勻后得到混合溶液；

步驟(10)：將透明質酸加入至步驟(9)得到的混合溶液中，混合均勻后得到混合物。

9.一種如權利要求7所述的CGF和臍帶間充質干細胞外泌體混合物的應用，其特征在于，所述混合物用于促進皮膚損傷愈合。