[發(fā)明專利]牛體外受精使用的培養(yǎng)液和提高牛體外受精的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110010657.6
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112322579B
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王娜;王小武;郝少強(qiáng);趙明禮;韓勇權(quán);郭春明;許曉椿
• 申請（專利權(quán)）人: 天津博裕力牧科技有限公司
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075;C12N5/076;A61D19/02
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本發(fā)明涉及牛體外受精使用的培養(yǎng)液和提高牛體外受精的方法。牛體外受精的方法包括如下步驟：將成熟的卵丘?卵母細(xì)胞復(fù)合體在受精培養(yǎng)液中洗滌，再轉(zhuǎn)移到受精培養(yǎng)液中，放入培養(yǎng)箱中，備用；從液氮中取凍精細(xì)管，37℃水浴解凍，使精液注入盛有精液制備培養(yǎng)液的離心管中，離心后棄上清；將精液制備培養(yǎng)液加入上述離心管，重懸精子沉淀，取適當(dāng)?shù)木討乙哼M(jìn)行精子計(jì)數(shù)；將計(jì)算好體積的精子懸液加入盛有卵母細(xì)胞的受精培養(yǎng)液滴中，并將培養(yǎng)盤放入培養(yǎng)箱，使精卵共孵育，完成體外受精操作，以備用于胚胎體外培養(yǎng)。涉及的受精培養(yǎng)液和精液制備培養(yǎng)液包含丙酮酸鈉和肝素等成分。本發(fā)明方法能夠顯著提高牛體外受精的效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于動(dòng)物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種用于農(nóng)業(yè)-畜牧獸醫(yī)繁殖的技術(shù)，具體涉及一種牛體外受精的方法，另外，本發(fā)明還涉及牛體外受精中使用的相關(guān)工作試液在牛體外受精中的應(yīng)用。本發(fā)明牛體外受精的方法具有優(yōu)異的技術(shù)效果。

背景技術(shù)

體外受精(In Vitro Fertilization)或(external fertilization)是指哺乳動(dòng)物的精子和卵子在體外人工控制的環(huán)境中完成受精過程的技術(shù)，英文簡稱為IVF。由于它與胚胎移植技術(shù)(ET)密不可分，又簡稱為IVF-ET。在生物學(xué)中，把體外受精胚胎移植到母體后獲得的動(dòng)物稱試管動(dòng)物(test-tube animal)。這項(xiàng)技術(shù)成功于20世紀(jì)50年代，在最近20年發(fā)展迅速，現(xiàn)已日趨成熟而成為一項(xiàng)重要而常規(guī)的動(dòng)物繁殖生物技術(shù)。

體外受精技術(shù)對動(dòng)物生殖機(jī)理研究、畜牧生產(chǎn)、醫(yī)學(xué)和瀕危動(dòng)物保護(hù)等具有重要意義。如用小鼠、大鼠或家兔等作實(shí)驗(yàn)材料，體外受精技術(shù)可用于研究哺乳動(dòng)物配子發(fā)生、受精和胚胎早期發(fā)育機(jī)理。在家畜品種改良中，體外受精技術(shù)為胚胎生產(chǎn)提供了廉價(jià)而高效的手段，對充分利用優(yōu)良品種資源，縮短家畜繁殖周期，加快品種改良速度等有重要價(jià)值。在人類，IVF-ET技術(shù)是治療某些不孕癥和克服性連鎖病的重要措施之一。體外受精技術(shù)還是哺乳動(dòng)物胚胎移植、克隆、轉(zhuǎn)基因和性別控制等現(xiàn)代生物技術(shù)不可缺少的組成部分。

隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技的發(fā)展，為了更充分利用良種母牛的繁殖潛力，加速遺傳育種進(jìn)程，在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用高效的繁殖新技術(shù)成為必然。活體采卵(Ovum pick UP，OPU)和體外受精技術(shù)(In Vitro Fertilization，IVF)是二十世紀(jì)八十年代快速發(fā)展起來的胚胎工程新技術(shù)，二者相結(jié)合可獲得大量遺傳系譜明確的胚胎，從而縮短世代間隔。目前，這兩種技術(shù)已經(jīng)成為歐美和大洋洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)國家的農(nóng)場主為擴(kuò)大良種母牛群而采用的重要繁殖技術(shù)。然而，采用常規(guī)的牛胚胎培養(yǎng)體系(CR1aa和SOF液)，牛體外受精的囊胚發(fā)育率較低，而且胚胎質(zhì)量也遠(yuǎn)不及體內(nèi)胚胎，導(dǎo)致胚胎移植受體后的妊娠率低，因此如何提高囊胚發(fā)育率及胚胎質(zhì)量成為體外受精胚胎生產(chǎn)的重點(diǎn)和研究的焦點(diǎn)。

早在1878年，德國人Scnenk就以家兔和豚鼠為材料，開始探索哺乳動(dòng)物的體外受精技術(shù)。但直到1951年，美籍華人張民覺和Austin分別發(fā)現(xiàn)精子體外獲能現(xiàn)象后，體外受精技術(shù)才獲得了突破性進(jìn)展。牛體外受精技術(shù)受到卵母細(xì)胞的體外成熟、精子的體外獲能、受精卵的體外培養(yǎng)環(huán)境等多個(gè)方面的影響。