[發明專利]一種規模化水蛭素分離純化生產工藝方法及設備

有效

• 申請號: 202110010624.1
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112480243B
• 公開（公告）日: 2023-05-05
• 發明（設計）人: 李煥華;周維海
• 申請（專利權）人: 廣西科康科技集團有限公司
• 主分類號: C07K14/815
• 分類號: C07K14/815;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30
• 代理公司: 南寧市來來專利代理事務所(普通合伙) 45118
• 代理人: 來臨

一種規模化水蛭素分離純化生產工藝方法及設備，經過誘導催吐、粗品收集、酸沉、水浴加熱、冷卻、平板離心過濾、中和、管式離心去沉淀、微濾、納濾濃縮，最終成品收集后冷凍干燥。本發明可實現水蛭素連續生產純化，可任意轉換產品純度等級的技術效果，具有連續性生產的特點，產量高，水蛭素原料回收率高，損耗少，生產高效快捷、操作方便等優點。

技術領域

本發明涉及生物醫藥制品技術領域，具體為一種規模化水蛭素分離純化生產工藝方法及設備。

背景技術

天然水蛭素是一種從吸血類水蛭唾液腺及其分泌液中提取的天然活性物質，水蛭素是一類很有前途的抗凝化瘀藥物，它可用于治療各種血栓疾病，尤其是靜脈血栓和彌漫性血管凝血的治療；也可用于外科手術后預防動脈血栓的形成，預防溶解血栓后或血管再造后血栓的形成；改善體外血液循環和血液透析過程。水蛭素還可配合化學治療和放射治療，由于促進腫瘤中的血流而增強療效。在生物醫學領域具有廣泛用途。

水蛭素是由65個或66個氨基酸殘基組成的單鏈多肽，分子量為7000d，能在極端的pH條件下穩定存在。水蛭素根據醫療、食品、化妝品等用途的不同，也分為若干純度等級進行生產和加工。近年來，采用活體水蛭催吐經收集水蛭素粗品，是得到產品質量穩定，可重復性好，成本較低的方式，如發明專利：一種天然水蛭素的規模化生產方法，專利號：CN201410402315.9中所述。得到水蛭素粗品后，還需要經過分離純化的一系列工序才能得到水蛭素產品。水蛭素粗品中含有水蛭素以外其他很多鹽分和雜質蛋白，包括水蛭體內分泌的其它消化酶等等，雜質蛋白沒有水蛭素的抗凝活性，視為雜質，這種雜質如果長期存在于產品中，會氧化分解水蛭素的有效成分，使水蛭素保質期縮短甚至預熱失效，因此水蛭素粗品需要進行分離純化，將多余的鹽分和雜質蛋白質去除，最終得到較為純凈的水蛭素產品。

純化水蛭素的方法一般通過沉淀、過濾、反滲透、層析等一系列步驟，對目標蛋白質及鹽分進行去除，最終得到較純的水蛭素產品，例如以下公開文獻：

1、一種天然水蛭素的生產方法；申請號：CN201110237495.6；申請人：周維官；摘要：一種天然水蛭素的生產方法，該生產方法的特征在于包括含天然水蛭素液體的提取、酸沉、加熱、脫水和干燥等步驟，所得到的天然水蛭素粉末，可采用Markwardt凝血酶直接滴定法檢測其活性成分的含量，使質量穩定，產品療效有保證。該方法具有工藝簡單、提取率高、生產成本低、產品純度高、保存期長等特點，可為食品、保健食品、藥品或化妝品提供安全、優質的原料。

其中，天然水蛭素粗提物通過酸沉去除沉淀物，水浴加熱去除沉淀物得清液，然后采用透析或超濾的方式對清液進行脫水得濃縮液，濃縮液加入水溶性填充液后冷凍干燥，最終得到水蛭素凍干粉。

2、一種基于親和層析的水蛭素分離純化方法；申請號：CN201810268931.8；申請人：蘇州至匯生物科技有限公司；摘要：一種基于親和層析的水蛭素分離純化方法，用生理鹽水喂飽水蛭活體后，物理擠壓使其分泌唾液并收集，將獲得的水蛭唾液樣本，加入預冷三氯乙酸提取液混勻，浸提，離心取上清，調節pH3.0-5.0后加入預冷的丙酮混勻靜置過夜，回收上清中丙酮，離心，取沉淀，備用；將所述沉淀加入蒸餾水，充分溶解，調節pH?6.0-8.0，用凝血酶Sepharose?4FF親合柱進行分離純化，高效液相色譜檢測水蛭素含量，取水蛭素含量峰值處純化液，將上述純化液進行透析，并且過程中重復加水2-4次，持續10-15h，將超濾后的上清液進行旋轉蒸發，去除水分70-80%后，取濃縮液凍干機凍干，得水蛭素產品。本發明方法純化所得的天然水蛭素純度高，活性高，成本低，操作簡單，易重復。