[發(fā)明專利]一種檢測(cè)4種食源性致病寄生蟲(chóng)的探針、芯片、試劑盒及方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110008380.3
• 申請(qǐng)日: 2021-01-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112501319B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-08-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林德春;金桃;張智閔;詹太平;蔣華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東美格基因科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/6893;C12Q1/6837;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 杭州信義達(dá)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33305
• 代理人: 萬(wàn)景旺

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)4種食源性致病寄生蟲(chóng)中一種或多種的探針組合，屬于微生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。其中，所述4種食源性致病寄生蟲(chóng)為廣州管圓線蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)、剛地弓形蟲(chóng)和豬肉絳蟲(chóng)。本發(fā)明還公開(kāi)了利用上述探針組合制備的基因芯片、試劑盒和檢測(cè)方法。利用本發(fā)明對(duì)4種食源性致病寄生蟲(chóng)進(jìn)行檢測(cè)，特異性強(qiáng)、靈敏度高，準(zhǔn)確性好，并且方便、快速，尤其適用于寄生蟲(chóng)載量低的樣本檢測(cè)，為感染診療和食品安全檢測(cè)提供更好的技術(shù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種檢測(cè)4種食源性致病寄生蟲(chóng)的探針、芯片、試劑盒及方法。

背景技術(shù)

食源性致病寄生蟲(chóng)病是當(dāng)今世界上最關(guān)注的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一，是由寄生蟲(chóng)通過(guò)多種途徑污染食品和飲水后，因生食或半生食含有感染期寄生蟲(chóng)的食物和水進(jìn)入人體，引起人的食源性致病寄生蟲(chóng)病的發(fā)生。近年來(lái)，食源性致病寄生蟲(chóng)病已成為新“富貴病”，特別是沿海經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)的城鎮(zhèn)居民的感染人數(shù)呈上升勢(shì)頭，且我國(guó)食源性致病寄生蟲(chóng)病具有分布廣、對(duì)人畜危害嚴(yán)重等特點(diǎn)。

食源性致病寄生蟲(chóng)主要包括吸蟲(chóng)、絳蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)和旋毛蟲(chóng)和孢子蟲(chóng)等。傳統(tǒng)的食源性致病寄生蟲(chóng)的檢測(cè)技術(shù)有染色涂片檢查、漂浮集卵法、沉淀集卵法、麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法和影像學(xué)等，傳統(tǒng)的方法操作復(fù)雜、周期過(guò)長(zhǎng)、陽(yáng)性率低等局限，不能滿足食品安全快速檢測(cè)的需求，也不利于食源性致病寄生蟲(chóng)感染等事件的處理。而近年來(lái)發(fā)展了一系列病原體核酸分子檢測(cè)技術(shù)，包括PCR、基因芯片、高通量測(cè)序基因檢測(cè)等。PCR具有較好的特異性及靈敏度，但每次只能檢測(cè)一種致病菌，存在通量低的缺陷，而二代測(cè)序技術(shù)雖然檢測(cè)的病原范圍大，但周期較長(zhǎng)（24h以上）、靈活度低、成本高、整個(gè)過(guò)程比較復(fù)雜，尤其是數(shù)據(jù)的解讀，目前仍然存在一定的困難。而基因芯片既具備高靈敏性和特異性，且成本較低、操作靈活、時(shí)效性高、針對(duì)性強(qiáng)，使得其十分適用于對(duì)特定類型樣本的病原檢測(cè)，適合臨床和食品安全檢測(cè)的應(yīng)用。

基因芯片（GeneChip）又稱為微陣列技術(shù)（MicroArray），主要包括5個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)：探針構(gòu)建、芯片制備、樣品制備、芯片實(shí)驗(yàn)、信號(hào)檢測(cè)及結(jié)果判讀。基因芯片上的探針設(shè)計(jì)是體現(xiàn)芯片檢測(cè)效能的核心因素之一，然后現(xiàn)有的特異性探針序列設(shè)計(jì)算法均從微生物的保守基因如細(xì)菌的16SrRNA、真菌的ITS等進(jìn)行挖掘，且采用長(zhǎng)序列比對(duì)的方式，故算法程序缺乏足夠的靈活性，且探針序列缺乏足夠的覆蓋度和靈敏性。不能滿足大規(guī)模的寄生蟲(chóng)檢測(cè)基因芯片的設(shè)計(jì)要求。此外，現(xiàn)有的芯片設(shè)計(jì)方法未考慮微陣列上熒光信號(hào)的區(qū)域不均勻性而對(duì)各類探針的排布進(jìn)行設(shè)計(jì)，現(xiàn)有的芯片設(shè)計(jì)方法缺乏熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)化處理。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題中的至少一個(gè)，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明第一方面提供一種檢測(cè)4種食源性致病寄生蟲(chóng)中一種或多種的探針組合，其中，所述4種食源性致病寄生蟲(chóng)為廣州管圓線蟲(chóng)、微小隱孢子蟲(chóng)、剛地弓形蟲(chóng)和豬肉絳蟲(chóng)。

廣州管圓線蟲(chóng)（Angiostrongylus cantonensis）是引起廣州管圓線蟲(chóng)病（食源性寄生蟲(chóng)病）的病原體，其成蟲(chóng)寄生于鼠的肺動(dòng)脈內(nèi)，人是該蟲(chóng)的非正常宿主。人因生食或半生食含有該寄生蟲(chóng)幼蟲(chóng)的褐云瑪瑙螺、福壽螺、蝸牛或蔬菜而感染該蟲(chóng)幼體，感染人體后其幼蟲(chóng)移行至機(jī)體中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并引發(fā)嗜酸性腦炎和腦膜腦炎，其癥狀常表現(xiàn)為劇烈頭痛、惡心、噴射性嘔吐和頸項(xiàng)強(qiáng)直等神經(jīng)系統(tǒng)癥狀。該病在熱帶和亞熱帶地區(qū)流行，在我國(guó)呈散在分布，多發(fā)生于沿海地區(qū)。

微小隱孢子蟲(chóng)（Cryptosporidium parvum）是一種呈全球性分布的重要食源性/水源性人獸共患的機(jī)會(huì)性致病，專性胞內(nèi)寄生蟲(chóng)，感染后寄生于哺乳動(dòng)物和人體小腸中，是重要的腹瀉病原之一，該蟲(chóng)體感染引起的隱孢子蟲(chóng)病多見(jiàn)于免疫功能低下或免疫缺陷人群，表現(xiàn)為急慢性腹瀉，并伴有發(fā)熱、惡心、咳嗽及呼吸困難等癥狀。