[發明專利]一種降低PCR非特異性擴增的核苷酸及其設計方法與應用在審
| 申請號： | 202110006795.7 | 申請日： | 2021-01-05 |
| 公開（公告）號： | CN112899346A | 公開（公告）日： | 2021-06-04 |
| 發明（設計）人： | 尚午;王友祥;楊志劼 | 申請（專利權）人： | 南京普濟生物有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12Q1/6848;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210008 江蘇省南京市江北新區新錦湖路*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 降低 pcr 非特 異性 擴增 核苷酸 及其 設計 方法 應用 | ||
1.一種降低PCR非特異性擴增的核苷酸的設計方法，其特征在于，所述的降低PCR非特異性擴增的核苷酸，包括序列A和序列B，所述序列A包括至少6個核苷酸，所述序列A中的核苷酸從A、T、C和G中選取三種堿基作為其構成；所述序列B包括至少4個核苷酸，所述序列B的核苷酸可為任意堿基，所述序列B可形成三維結構。
2.根據權利要求1所述的設計方法，其特征在于，將所述的降低PCR非特異性擴增的核苷酸進行預處理，所述預處理方法包括：將序列A和序列B連接后，得到組合核苷酸；將所述組合核苷酸加入到緩沖液中加熱至65~85℃，保溫5~10分鐘，然后冷卻至0~40℃，保溫20~30分鐘。
3.根據權利要求2所述的設計方法，其特征在于，所述緩沖液的組分為：300+±10 mMNaCl, 5±1 mM MgCl2, 20±5 mM Tris (pH 7.6)。
4.根據權利要求2所述的設計方法，其特征在于，所述緩沖液包括0.001~0.003 μM的吡啶酮偶氮化合物。
5.一種根據權利要求1至4任一權項所述的設計方法制備得到的核苷酸。
6.一種使用權利要求5所述的核苷酸在PCR擴增中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述的應用包括：在所述PCR擴增中，使用DNA聚合酶和0.001~0.003 μM的吡啶酮偶氮化合物。
8.一種降低PCR非特異性擴增的核苷酸，其特征在于，所述的核苷酸包括序列A和序列B，所述序列A包括至少6個核苷酸，所述序列A中的核苷酸從A、T、C和G中選取三種堿基作為其構成；所述序列B包括至少4個核苷酸，所述序列B的核苷酸可為任意堿基，所述序列B可形成三維結構。
9.根據權利要求8所述的核苷酸，其特征在于，將所述的核苷酸進行預處理，所述預處理方法包括：將序列A和序列B連接后，得到組合核苷酸；將所述組合核苷酸加入到緩沖液中加熱至65~85℃，保溫5~10分鐘，然后冷卻至0~40℃，保溫20~30分鐘。
10.根據權利要求8或9所述的核苷酸，其特征在于，所述緩沖液的組分為：300+±10 mMNaCl, 5±1 mM MgCl2, 20±5 mM Tris (pH 7.6)。
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