[發明專利]一種煙草包衣種子活力的檢測方法

在審

• 申請號: 202110004127.0
• 申請日: 2021-01-04
• 公開（公告）號: CN112834703A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 周向平;胡日生;楊全柳;彭曙光;肖欽之;王錫春;麻浩;李清;劉卉;張洪波
• 申請（專利權）人: 湖南省煙草公司永州市公司
• 主分類號: G01N33/00
• 分類號: G01N33/00
• 代理公司: 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219
• 代理人: 張建斌

1.一種煙草包衣種子活力的檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

將煙草包衣種子在14℃～18℃，濕度100％，光照11～13h、黑暗11～13h條件下進行低溫脅迫試驗，設置3～5個重復；

脅迫試驗6～8天后，將所述的煙草包衣種子轉到24℃～25℃，濕度90％～100％，光照11～13h、黑暗11～13h條件下，進行6～8天的標準發芽試驗，使所述的煙草包衣種子一共生長14～16天，同時對所述的煙草包衣種子發芽過程中的萌發指標、活力指標以及生理指標進行測定，并通過對這些指標進行綜合分析判斷包衣種子活力的高低。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括對生長14～16天期間以及14～16天后的幼苗的萌發指標、活力指標以及生理指標進行測定和計算方法如下：

(1)萌發指標：從開始試驗放入煙草包衣種子起至第14～16天終止，統計發芽包衣種子粒數占所述的煙草包衣種子總數的百分率，記為發芽率；

從開始試驗放入所述的煙草包衣種子后的第7或8天，統計發芽包衣種子粒數占供試包衣種子總數的百分率，記為發芽勢；

發芽第14～16天，取50株幼苗用自來水沖洗干凈，吸干表面水分后在80℃下烘干至恒重后稱量，精確到mg，取平均值，記為干重S；隨機取10個正常生長的幼苗，用直尺分別測幼苗全長，取平均值，記為芽長；

(2)活力指標：GI＝∑(Gt/DT)，其中GI為發芽指數，式中Gt為第t天的發芽數，Dt為發芽日數；

VI＝S×GI，其中VI為活力指數，GI為發芽指數，S為幼苗干重；

MGT＝∑(Gt×Tt)/∑Gt；其中MGT為平均發芽時間，Gt是時間Tt中新發芽包衣種子的數量；

(3)生理指標：

過氧化物歧化酶酶活力測定：

①稱取生長14～16天后的包衣種子幼苗W_樣品＝0.500g于已經過滅菌處理的研磨管中，分別加入2mL提前經過預冷處理的磷酸緩沖液，所述的磷酸緩沖液濃度為50mmol/L，pH7.8，并冰上進行迅速研磨成勻漿，繼續加入磷酸緩沖液至終體積為5mL，于4℃條件下10000rpm離心15min，吸取管中上清液至另一個新的1.5mL離心管，測量體積V_T后作為過氧化物歧化酶粗酶液備用；

②取7支質地相同、透明的5mL試管，其中3支作為測定管，4支為對照管，所述的對照管中3支為最大光還原管，1支為參比管，按表1依次加入所有溶液或試劑；

③充分混勻所有反應體系后，將1支對照管置于暗處，另3支對照管作為最大光還原管置于4000lux光照下反應20min；

④遮住試管，以終止反應。以不照光的對照管做參比，分別在560nm波長下測定其他各管的吸光度值A；

⑤結果計算：

已知過氧化物歧化酶活性單位以抑制氮藍四唑光化還原的50％為一個酶活單位(Unit，U)表示，按下列公式計算過氧化物歧化酶活性：

其中：V_Q為測定時樣品用量(mL)；A_{最大光還原管}為最大還原管的吸光度值；A_樣品管為樣品管的吸光度值；

表1 過氧化物歧化酶活性測定反應體系

丙二醛含量的測定：

①稱取對照組和各處理的生長14～16天后的包衣種子幼苗新鮮葉片各0.500g于已預冷的研缽中，加入5mL質量百分含量為5％的三氯乙酸后立即進行研磨，待研磨充分，將該勻漿轉移至另一個新的離心管中，室溫，5000rpm離心10min；

②小心吸取2mL上清液，加入等體積濃度為0.67％的硫代巴比妥酸，混勻完全后進行沸水浴，持續30min，待其冷卻后離心；

③利用分光光度計，分別測定每管在450nm、532nm和600nm處的吸光度，計算丙二醛含量，μmol g^-1·鮮重：

丙二醛含量(μmol g^-1·鮮重)＝6.45×(A₅₃₂–A₆₀₀)–0.56×A₄₅₀

(4)對測定的相關指標進行方差分析，通過差異水平綜合判斷該煙草品種包衣種子活力的高低。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，對發芽培養皿中的水分控制，培養皿中不能見明水，但也不能使濾紙變干。