[發明專利]檢測慢性肝炎轉化為肝硬化的風險預測位點的引物和方法

在審

• 申請號: 202110003237.5
• 申請日: 2021-01-04
• 公開（公告）號: CN112626199A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 陳雪青;王淑一
• 申請（專利權）人: 杭州艾迪康醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/686;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍;徐關壽

本發明公開了檢測慢性肝炎轉化為肝硬化的風險預測位點rs72613567:TA的引物、方法和試劑盒，包括擴增rs72613567位點的引物；采用Sanger測序技術，可用于快速檢測慢性肝炎患者體內rs72613567位點突變情況。利用本發明完成的檢測結果準確，可為預防慢性肝炎轉化為肝硬化提供風險評估和遺傳學指導。

技術領域

本發明屬生命科學和生物技術領域，特別涉及檢測慢性肝炎轉化為肝硬化的風險預測位點rs72613567突變的引物，采用普通PCR結合Sanger測序技術，可用于快速檢測慢性肝炎患者體內HSD17B13基因的rs72613567位點的突變情況。

背景技術

慢性肝炎是世界范圍內的主要疾病之一，導致較高的死亡率。慢性肝炎常見的病因有肝炎病毒(乙肝病毒，丙肝病毒)感染、長期飲酒、非酒精性脂肪肝(NAFLD)、自身免疫性肝炎等。病程呈波動性或持續進行性，如不進行適當的治療，部分患者可進展為肝硬化。然而，這種疾病的病程在個體之間有差異，這種差異至少在一定程度上歸因于遺傳風險因素。近年來，基因因素在慢性肝病進展中的作用已成為肝病學界的主要研究領域之一。

最近有研究發現17β-羥基甾體脫氫酶13(HSD17B13)單堿基突變和慢性肝損傷之間的關聯。17β-羥基類固醇脫氫酶(17β-HSDs)是一類NAD(P)H/NAD(P)依賴的氧化還原酶，因其可以氧化類固醇的第17位碳而得名。在輔助因子NAD(P)H/NAD(P)⁺的幫助下，17β-HSDs可以通過氧化17-羥或者還原17-酮從而使18碳或者19碳的類固醇活化或者失活。目前在哺乳動物中，該家族已報道有14名成員，根據發現的順序依次命名為17β-HSD1-14。2007年，上海復旦遺傳所的劉等人從人肝臟的cDNA文庫克隆出HSD17B13。此酶在肝臟中高表達，在17β-HSD家族的14個成員中，只有HSD17B13和HSD17B11這兩個基因的染色體位于4q22.1。該區域富含一類編碼視黃醇脫氫酶的基因，因此HSD17B13的染色體定位提示這個酶可能參與視黃醇代謝。

一項大規模研究使用外顯子序列方法在四個獨立的隊列中識別HSD17B13變體和慢性肝損傷之間的關聯。結果顯示，HSD17B13 rs72613567與降低酒精性和非酒精性肝病的風險相關，包括慢性肝炎進展為肝硬化和脂肪變性進展為脂肪性肝炎。最近丹麥的一項人口研究也表明，攜帶HSD17B13 rs72613567變異與降低丙氨酸轉氨酶(ALT)水平有關，并發現這種降低ALT的效果被脂肪肝和飲酒的遺傳風險所放大，提示HSD17B13 rs72613567對酒精性肝病和NAFLD有保護作用。

有功能研究表明，rs72613567由位于編碼基因區域(chr4:87310241,GRCh38.p7)附近的一個腺嘌呤插入(A-ins)組成，該插入位點位于內含子6的供體剪接位點附近，導致HSD17B13蛋白發生幀移位和過早截斷，造成酶活性的降低。也有報道HSD17B13基因的rs72613567:TA變異影響肝臟脂質穩態。雖然目前作用機制尚不明確，但HSD17B13蛋白在攜帶rs72613567A-ins等位基因的患者肝臟中表達明顯降低，同時降低了慢性肝病進展為肝硬化的風險。這種有益的效應在減少肝損傷甚至在遺傳易感性方面可能成為一個潛在的藥物靶標。

據文獻報道rs72613567:TA在西班牙裔美國人和非洲人(分別為9％和1～8％)中發病率較低，但在東亞人和歐洲人(分別為27～40％和22～31％)中發病率較高。開發檢測rs72613567:TA的方法，即可為預防慢性肝炎轉化為肝硬化提供風險評估和遺傳學指導，也可進一步推動其致病機理的研究和靶向藥物的研發。

Sanger測序法是基因檢測的主要手段之一，也是基因檢測的金標準。通過測序法對HSD17B13 rs72613567:TA突變進行檢測，可為慢性肝炎患者的提供風險評估和遺傳學指導。本發明中發現HSD17B13基因的rs72613567位點的突變在中國人群中存在較普遍，發生率為44.12％。

發明內容