[發明專利]一種石莼多糖裂解酶突變體及其應用有效
| 申請號： | 202110002931.5 | 申請日： | 2021-01-04 |
| 公開（公告）號： | CN112646799B | 公開（公告）日： | 2022-01-18 |
| 發明（設計）人： | 劉夫鋒;柴成程;汪文倩;張佳鈺;路福平 | 申請（專利權）人： | 天津科技大學 |
| 主分類號： | C12N9/88 | 分類號： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N15/66;C12N1/21;C12P19/12;C12P19/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京瑞盛銘杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11617 | 代理人： | 郭曉迪 |
| 地址： | 300457 天津市濱*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 多糖 裂解 突變體 及其 應用 | ||
1.一種石莼多糖裂解酶突變體，其特征在于，所述石莼多糖裂解酶突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.權利要求1所述石莼多糖裂解酶突變體的編碼基因。
3.一種重組載體，其特征在于，包含權利要求2所述編碼基因。
4.一種宿主細胞，其特征在于，包含權利要求2所述編碼基因或權利要求3所述重組載體。
5.如權利要求4所述宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞是大腸桿菌BL21或大腸桿菌JM109。
6.權利要求1所述石莼多糖裂解酶突變體用于裂解石莼多糖生產石莼寡糖的用途。
7.一種制備如權利要求1所述石莼多糖裂解酶突變體的方法，包括如下步驟：
（1）分別將合成的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示的野生型基因和表達載體pQE80L利用
（2）以步驟（1）所述重組載體為模板，利用核苷酸序列如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的引物對，通過反向PCR擴增得到含有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列的PCR產物；
（3）將步驟（2）所述PCR產物用連接酶連接后，轉入大腸桿菌JM109中培養，獲得含有石莼多糖裂解酶突變體的編碼基因的重組載體；
（4）將步驟（3）所述重組載體轉化至大腸桿菌BL21的感受態細胞中，獲得含有石莼多糖裂解酶突變體基因的宿主細胞；
（5）將步驟（4）所述宿主細胞在適宜條件下進行培養，誘導表達，收集表達產物中的石莼多糖裂解酶，通過親和層析方法純化得到石莼多糖裂解酶活性蛋白。
8.一種降解石莼多糖的方法，該方法包括使石莼多糖與權利要求1所述石莼多糖裂解酶突變體接觸的步驟，在能夠通過所述石莼多糖裂解酶突變體的酶促催化作用降解石莼多糖的條件下進行。
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