[發(fā)明專利]檢測新冠病毒的方法及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110000672.2
• 申請日: 2021-01-04
• 公開（公告）號: CN112322797A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張磊;李聰
• 申請（專利權(quán)）人: 北京昱晟達(dá)醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 梁文惠

本發(fā)明公開了一種檢測新冠病毒的方法及試劑盒。其中，該方法包括以下步驟：1）采集樣本；2）采用核酸釋放劑提取核酸；3）采用LAMP擴增進行檢測，其中，核酸釋放劑包括：熱敏蛋白酶1000U/L~10000U/L、Tris?HCl 5~50 mmol/L、曲拉通X?100體積百分比0.05%~0.5%和金屬離子螯合劑0.1~0.5mmol/L，其余為無菌水，熱敏蛋白酶為≥55℃加熱5~10分鐘會完全失活的蛋白酶。應(yīng)用本發(fā)明的檢測新冠病毒的方法及試劑盒，檢測新冠病毒，檢測周期短，操作簡單方便，檢測結(jié)果通俗易懂，檢測特異性高，檢測成本低。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及核酸檢測的技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種檢測新冠病毒的方法及試劑盒。

背景技術(shù)

新型冠狀病毒COVID-19是引發(fā)“新冠肺炎”的主要病原體及病因。該病毒首次報道以來，在短短的兩個月內(nèi)已導(dǎo)致數(shù)萬人染病，約五分之一的感染者為臨床重癥甚至危重癥。該病毒潛伏期最長可達(dá)42天，病情進展迅速，并且能夠通過空氣飛沫、氣溶膠傳播，使得全世界很多個國家與地區(qū)都有感染者，并且持續(xù)擴散。對整個社會造成了巨大的影響。

該病毒能引起干咳，嗓子疼痛，頭暈，乏力等癥狀與普通感冒發(fā)燒不易區(qū)別，準(zhǔn)確分辨COVID-19與普通流感病毒等對于疾病控制有重要意義。而核酸檢測則是判定該病毒的金標(biāo)準(zhǔn)。

目前，新冠檢測中所采用的核酸提取方法多為普遍的核酸提取試劑盒法（多為柱法和磁珠法等），但這些方法步驟較復(fù)雜，耗時較長且成本相對較高，而且由于操作復(fù)雜更易造成污染問題。核酸提取后續(xù)的檢測通常采用普通PCR或熒光定量PCR，但是普通PCR以及熒光定量PCR均需要精密的儀器以滿足擴增過程中的升降溫且檢測時間相對較長。

另外，核酸提取試劑盒法及PCR都需要專業(yè)的實驗人員進行操作，結(jié)果需要專業(yè)分析，廣泛推廣應(yīng)用受到限制。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明旨在提供一種檢測新冠病毒的方法及試劑盒，以提高檢測新冠病毒的效率并降低污染率。

為了實現(xiàn)上述目的，根據(jù)本發(fā)明的一個方面，提供了一種檢測新冠病毒的方法。該方法包括以下步驟：1）采集樣本；2）采用核酸釋放劑提取核酸；3）采用LAMP擴增進行檢測，其中，核酸釋放劑包括：熱敏蛋白酶1000U/L~10000U/L、Tris-HCl 5~50 mmol/L、曲拉通X-100體積百分比0.05%~0.5%和金屬離子螯合劑 0.1~0.5mmol/L，其余為無菌水，熱敏蛋白酶為≥55℃加熱5~10分鐘會完全失活的蛋白酶。

進一步地，步驟1）包括：向待采集的物體表面噴涂稀釋劑，用采樣拭子刮取噴涂有稀釋劑的待采集的物體表面數(shù)次；優(yōu)選的，稀釋劑為焦碳酸二乙酯處理過的水。

進一步地，步驟2）包括：將采樣拭子放入盛裝有核酸釋放劑的采集管中浸泡，振蕩混勻，室溫靜置10~30分鐘，然后55℃~95℃加熱5~10分鐘，靜置至室溫，得到核酸溶液。

進一步地，步驟3）包括：將步驟2）得到的核酸溶液進行LAMP擴增，擴增溫度為60~65℃，擴增時間為30~60分鐘，檢測擴增曲線。

進一步地，LAMP擴增的反應(yīng)體系見下表：

優(yōu)選為下表：

。

進一步地，LAMP擴增所用的引物為：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQID NO：4、SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6。

進一步地，步驟2）還包括：采用帶亞氨基二乙酸鹽修飾的陽離子吸附樹脂吸附核酸溶液，吸附后的上清用于LAMP擴增。