[發(fā)明專利]ZSCAN4核酸和蛋白質(zhì)向細胞和組織的基于溫度的瞬時遞送

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202080097320.7
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN115175689A
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: M·S·H·柯
• 申請（專利權(quán)）人: 伊利克斯根治療公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61P35/00;C12N15/09;A61K48/00;C12N15/85
• 代理公司: 北京坤瑞律師事務(wù)所 11494
• 代理人: 封新琴

1.一種治療血液或造血器官疾病的方法，所述方法包括：

i)將造血干細胞從骨髓動員至患有所述疾病的人受試者的外周血；

ii)從獲自所述受試者的外周血單個核細胞樣品分離CD34+細胞；

iii)在33℃±0.5℃的溫度下孵育所述分離的CD34+細胞；

iv)使所述孵育的CD34+細胞與包含含有人ZSCAN4的編碼區(qū)的異源核酸的溫度敏感性仙臺病毒載體接觸；

v)將所述接觸的CD34+細胞在33℃±0.5℃的允許溫度下維持至少約12-72小時，其中所述溫度敏感性仙臺病毒載體的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄在所述允許溫度下發(fā)生，導(dǎo)致人ZSCAN4的表達增加；以及

vi)在適于植入所述細胞以治療所述疾病的條件下將所述接觸的CD34+細胞輸注到所述受試者中。

2.一種治療血液或造血器官疾病的方法，所述方法包括：

i)將造血干細胞從骨髓細胞動員至患有所述疾病的人受試者的外周血；

ii)從獲自所述受試者的外周血單個核細胞樣品分離CD34+細胞；

iii)使所述分離的CD34+細胞與包含含有人ZSCAN4的編碼區(qū)的異源核酸的溫度敏感性仙臺病毒載體接觸；

iv)將所述接觸的CD34+細胞在33℃±0.5℃的允許溫度下孵育至少約12-72小時，其中所述溫度敏感性仙臺病毒載體的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄在所述允許溫度下發(fā)生，導(dǎo)致人ZSCAN4的表達增加；以及

v)在適于植入所述細胞以治療所述疾病的條件下將所述接觸的CD34+細胞輸注到所述受試者中。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，所述方法進一步包括在步驟v)之后，在將所述接觸的CD34+細胞輸注到所述受試者中之前，在37℃±0.5℃的非允許溫度下孵育所述接觸的CD34+細胞，其中所述溫度敏感性仙臺病毒載體的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄以及人ZSCAN4的表達在所述非允許溫度下停止。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，所述方法進一步包括在步驟iv)之后，在將所述接觸的CD34+細胞輸注到所述受試者中之前，在37℃±0.5℃的非允許溫度下孵育所述接觸的CD34+細胞，其中所述溫度敏感性仙臺病毒載體的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄以及人ZSCAN4的表達在所述非允許溫度下停止。

5.根據(jù)權(quán)利要求3或權(quán)利要求4所述的方法，其中將所述接觸的CD34+細胞在37℃±0.5℃的非允許溫度下孵育約30分鐘至約10天，任選地約30-180分鐘。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中通過向所述受試者施用粒細胞集落刺激因子和普樂沙福中之一或二者來動員所述造血干細胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其中所述外周血單個核細胞通過單采術(shù)從所述受試者獲得。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中通過使用抗CD34抗體和磁珠進行陽性選擇從所述外周血單個核細胞分離所述CD34+細胞。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中在輸注之前將所述接觸的CD34+細胞洗滌并重懸于無菌等滲水溶液中。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中將所述接觸的CD34+細胞以約1.0x 10^5個細胞/kg至約1.0x 10^7個細胞/kg，任選地約2.0-8.0x 10^6個細胞/kg的劑量靜脈內(nèi)輸注。