[發明專利]增加精細化學品生產中的時空產率、碳轉化效率和碳底物靈活性

在審

• 申請號: 202080096521.5
• 申請日: 2020-12-16
• 公開（公告）號: CN115485387A
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發明（設計）人: H·施羅德;A-C·海勒;B·霍夫;O·澤爾德;P·厄德曼;G·B·旺德利;C·迪奇;M·庫馬爾;D·薩托里;M·D·布蘭克希恩;J·K·普拉斯邁爾
• 申請（專利權）人: 巴斯夫歐洲公司
• 主分類號: C12P19/00
• 分類號: C12P19/00;C12N9/88
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 王健;林曉紅

1.增加適合生產一種或多種精細化學品的宿主生物生產的所述一種或多種精細化學品的生產的碳底物靈活性和/或增加適合生產一種或多種精細化學品的宿主生物生產的所述一種或多種精細化學品的碳轉化效率和/或增加適合生產一種或多種精細化學品的宿主生物生產的所述一種或多種精細化學品的時空產率的方法，包括以下步驟：與未經修飾的宿主生物相比，增加所述宿主生物的3’,5’-環單磷酸腺苷(cAMP，CAS編號：60-92-4)水平，將所述宿主生物維持在允許其生長的環境中，使所述宿主生物在存在底物及在適于生產一種或多種精細化學品的條件下生長，并且任選將一種或多種精細化學品與所述宿主生物或其剩余物分離。

2.根據前述權利要求的方法，其中所述宿主生物的cAMP水平通過以下方式增加：

a.失活在野生型腺苷酸環化酶中發現的調節活性，和/或

b.產生缺乏在野生型腺苷酸環化酶中發現的調節活性的突變的腺苷酸環化酶，和/或

c.將缺乏野生型腺苷酸環化酶中發現的調節活性的突變的腺苷酸環化酶引入所述宿主生物。

3.根據前述權利要求任一項的方法，其中所述宿主生物的cAMP水平以可誘導方式增加并且所述增加是與沒有誘導的宿主生物進行比較的。

4.根據權利要求2的方法，其中所述突變的腺苷酸環化酶通過引入轉基因而引入。

5.根據權利要求2、3或4的方法，其中所述突變的腺苷酸環化酶或具有失活的調節活性的腺苷酸環化酶與所述宿主生物的野生型形式的腺苷酸環化酶相比具有缺失。

6.根據權利要求5的方法，其中所述缺失是去除腺苷酸環化酶的調節部分而不破壞產生cAMP的部分。

7.根據權利要求5或6的方法，其中所述缺失是蛋白質對應于由大腸桿菌cyaA基因編碼的腺苷酸環化酶的C末端部分的調節部分、優選對應于SEQ ID NO：19或20提供的CyaA蛋白的C末端部分的部分的缺失、或與位置1至412具有至少80％序列相同性的腺苷酸環化酶蛋白。

8.根據前述權利要求任一項的方法，其中所述方法包括為所述宿主生物供應碳源的步驟，其中所述碳源是復合或指定碳源或其組合。

9.根據前述權利要求任一項的方法，其中所述宿主生物是經遺傳修飾的微生物細胞及其中優選所述一種或多種精細化學品是一種或多種寡糖，以及其中所述方法包括在所述經遺傳修飾的微生物生長之前，在經遺傳修飾的微生物中失活或去除Crr蛋白或對應于大腸桿菌中Crr蛋白(SEQ ID NO:26)的內源蛋白的步驟。

10.適用于生產精細化學品的經修飾的宿主細胞，其中所述宿主細胞能夠在甘油和/或葡萄糖和/或麥芽糖和/或果糖和/或蔗糖上、優選在蔗糖、甘油、葡萄糖和/或果糖上生長，其中所述經修飾的宿主細胞包含具有失活的或不存在的調節活性的腺苷酸環化酶，其具有腺苷酸環化酶活性，并且其中所述宿主生物與未經修飾的宿主細胞相比具有增加的cAMP水平，其中所述未經修飾的宿主細胞基本上不能在甘油和/或葡萄糖和/或麥芽糖和/或果糖和/或蔗糖上生長。

11.根據權利要求10的經修飾的宿主細胞，其中對應于由大腸桿菌的cyaA基因編碼的蛋白的至少一種腺苷酸環化酶蛋白缺乏調節活性，優選缺乏對應于SEQ ID NO：19或20提供的CyaA蛋白的C-末端部分的部分，或是與位置1至412具有至少80％序列相同性的腺苷酸環化酶蛋白。