[發明專利]用于腺相關病毒的穩定劑和通過使用所述穩定劑穩定腺相關病毒的方法

在審

• 申請號: 202080096092.1
• 申請日: 2020-11-20
• 公開（公告）號: CN115103692A
• 公開（公告）日: 2022-09-23
• 發明（設計）人: 金洪起;李汶修;都敏載
• 申請（專利權）人: 伊諾特納皮株式會社
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K9/08;A61K47/42;A61K47/26;A61K47/18;A61K47/54
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產權代理有限責任公司 11204
• 代理人: 王達佐;洪欣

提出了用于腺相關病毒(AAV)的穩定劑和使用所述穩定劑穩定腺相關病毒的方法。更具體地，本公開內容涉及用于腺相關病毒的穩定劑，其包含表面活性劑或白蛋白；腺相關病毒液體制劑，其包括腺相關病毒穩定劑；以及具有改善的穩定性的腺相關病毒的生產方法。當使用腺相關病毒產生基因遞送病毒和治療性納米顆粒并為此目的形成另外的多酚結合物時，根據本公開內容的技術抑制病毒之間的過度聚集，從而將顆粒尺寸維持在用于藥物遞送的有效尺寸并改善液相的穩定性。因此，預期所述技術在用于基因療法的藥物遞送技術領域中非常有用。

技術領域

本公開內容涉及用于腺相關病毒(AAV)的穩定劑和使用所述穩定劑穩定腺相關病毒的方法。更具體地，本公開內容涉及用于腺相關病毒的穩定劑，其包括表面活性劑或白蛋白；腺相關病毒液體制劑，其包括腺相關病毒和穩定劑；以及具有改善的穩定性的腺相關病毒的生產方法。

背景技術

基因療法是通過基因轉移和表達治療疾病的技術。與藥物療法不同，基因療法是通過靶向引起疾病的特定基因來糾正遺傳缺陷的治療。基因療法的最終目的是通過遺傳修飾活細胞獲得有益的治療效果。基因療法的主要研究領域可以概括為引入對特定疾病具有治療效果的基因，增強正常細胞對抗癌藥物等顯示出抗性的抗性功能，或者在患有各種遺傳疾病的患者中替代修飾的或丟失的基因的領域。

用于基因療法的基因遞送技術可以主要分為使用病毒作為轉運蛋白的方法(基于病毒載體的轉移方法)，使用合成磷脂或陽離子聚合物等的非病毒遞送方法，以及通過向細胞膜施加臨時電刺激而引入基因的物理方法，如電穿孔。在以上遞送技術中，基于病毒載體的轉移方法使用治療性基因替換基因而缺乏一些或全部復制能力的載體作為遞送介質，并且是基因療法的優選方法，因為可以有效地進行基因的遞送。用作病毒媒介物或病毒載體的病毒包括RNA病毒載體(逆轉錄病毒載體、慢病毒載體等)和DNA病毒載體(腺病毒載體、腺相關病毒載體等)，此外還有單純皰疹病毒載體、α病毒載體等。最近，有關慢病毒和腺相關病毒的研究已經在相關研究中積極進行(BRIC View2016-T22)。

腺相關病毒(AAV)是屬于細小病毒科(Parvoviridae)和依賴性病毒屬(Dependovirus)的單鏈原病毒。腺相關病毒不具有單獨增殖的能力，并且需要與輔助病毒如腺病毒和痘苗病毒共存以進行復制。在腺相關病毒的生產中，用表達rep部分和cap部分的其它質粒DNA轉染腺相關病毒，并加入腺病毒作為輔助病毒。

腺相關病毒是基因療法中非常廣泛使用的載體，因為腺相關病毒不在感染的細胞中復制，誘導相對溫和的免疫應答，并且基因插入的位置在某種程度上是可預測的。然而，腺相關病毒通常產生野生型蛋白殼的遺傳變體以提高生產效率或感染效率和靶標遞送能力，并且這些病毒表面變化可降低在外部環境中的穩定性。特別地，由于重組腺相關病毒在水溶液中是不穩定的，因此隨著時間的推移在聚集和表面吸附方面存在問題，因此在長期儲存方面存在問題。特別地，即使當將功能性分子引入腺相關病毒的表面時，這種不穩定特性也是一個問題，并且大多數腺相關病毒在引入過程中聚集。這些聚集的病毒形成晶體并生長至10μm或更大的尺寸，從而誘導栓塞，其阻斷血管并最終導致注射個體的死亡。

現有的提高腺相關病毒穩定性的技術集中在如何盡可能長時間儲存腺相關病毒而不喪失腺相關病毒的感染性，但是防止功能性分子被引入表面時引起結晶的研究還沒有很大進展。因此，有必要開發一種即使在引入功能性分子時也能保持穩定性，同時增強腺相關病毒本身的穩定性的技術。

公開內容

技術問題

在相關技術中使用腺相關病毒(AAV)作為基因載體的情況下，由于AAV在體內/體外溶液中的不穩定特點，發生AAV之間的聚集和表面吸附，導致不良的穩定性。此外，當用諸如多酚的材料對AAV進行表面改性時，會發生過度聚集，導致可能在體內引起栓塞的結晶顆粒的形成。本申請的發明人已經證實，通過表面活性劑或白蛋白處理顯著抑制AAV之間的結晶顆粒的聚集和形成，并且長時間保持穩定性，從而完成本公開內容。

因此，本公開內容的目的是提供用于腺相關病毒(AAV)的穩定劑，包括表面活性劑或白蛋白。