[發(fā)明專利]治療血紅蛋白病的經(jīng)修飾的細(xì)胞和方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202080095711.5
• 申請(qǐng)日: 2020-12-09
• 公開（公告）號(hào): CN115175990A
• 公開（公告）日: 2022-10-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: J·L·戈里;E·奧佩潘·德·拉莫特-德赫茲;J·希斯;J·A·左瑞斯;K·常
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 愛迪塔斯醫(yī)藥公司
• 主分類號(hào): C12N5/10
• 分類號(hào): C12N5/10;C12N15/90;C12N15/113;A61K35/28;A61P7/06;A61K48/00;A61K38/46
• 代理公司: 北京市君合律師事務(wù)所 11517
• 代理人: 吳瑜;張璐

1.一種經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，所述第一群體包含

多個(gè)經(jīng)修飾的CD34+或造血干細(xì)胞，

所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在HBG基因啟動(dòng)子中具有插入缺失，

作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞包括HBG1啟動(dòng)子、HBG2啟動(dòng)子或其組合中的HBG1/2c.-104至-121缺失，并且

所述HBG1/2 c.-104至-121缺失占作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中的插入缺失的2％或更多。

2.如權(quán)利要求1所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中所述HBG1/2 c.-104至-121缺失占作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中的插入缺失的小于25％。

3.一種經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，所述第一群體包含

多個(gè)經(jīng)修飾的CD34+或造血干細(xì)胞，

所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在HBG基因啟動(dòng)子中包括插入缺失，并且

在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，60％或更多的插入缺失是至少4個(gè)堿基對(duì)的缺失。

4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，所述第一群體通過包括以下的方法產(chǎn)生：將包括第一指導(dǎo)RNA(gRNA)和Cpf1 RNA指導(dǎo)的核酸酶或經(jīng)修飾的Cpf1RNA指導(dǎo)的核酸酶的第一RNP復(fù)合物，遞送至包含多個(gè)未經(jīng)修飾的CD34+或造血干細(xì)胞的未經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，以產(chǎn)生所述插入缺失，所述第一gRNA包括第一gRNA靶向結(jié)構(gòu)域。

5.一種經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，所述第一群體包含：

多個(gè)經(jīng)修飾的CD34+或造血干細(xì)胞，

所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞在HBG基因啟動(dòng)子中包括插入缺失，并且

在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，60％或更多的插入缺失是至少4個(gè)堿基對(duì)的缺失；

所述插入缺失通過將包括第一gRNA和Cpf1 RNA指導(dǎo)的核酸酶或經(jīng)修飾的Cpf1 RNA指導(dǎo)的核酸酶的第一RNP復(fù)合物遞送至包含多個(gè)未經(jīng)修飾的CD34+或造血干細(xì)胞的未經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體來產(chǎn)生，所述第一gRNA包括第一gRNA靶向結(jié)構(gòu)域。

6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，25％或更多的插入缺失是至少4個(gè)堿基對(duì)的缺失，并且通過修復(fù)機(jī)制而不是微同源介導(dǎo)的末端連接(MMEJ)修復(fù)來引入。

7.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，25％或更多的插入缺失是至少4個(gè)堿基對(duì)的缺失，并且通過非同源末端連接(NHEJ)修復(fù)來引入。

8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，50％或更多的插入缺失是1個(gè)堿基對(duì)和25個(gè)堿基對(duì)之間的缺失。

9.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，50％或更多的插入缺失是3個(gè)堿基對(duì)和25個(gè)堿基對(duì)之間的缺失。

10.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，50％或更多的插入缺失是4個(gè)堿基對(duì)和25個(gè)堿基對(duì)之間的缺失。

11.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的經(jīng)修飾的細(xì)胞的第一群體，其中在作為整體的所述多個(gè)經(jīng)修飾的細(xì)胞中，50％或更多的插入缺失是5個(gè)堿基對(duì)和25個(gè)堿基對(duì)之間的缺失。